DB65T 4645-2023苹果枝枯病菌检疫鉴定方法.docxVIP

ICS 65.020.01 CCS B 16 DB 65 新 疆 维 吾 尔 自 治 区 地 方 标 准 DB 65/T 4645—2023 苹果枝枯病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Erwinia amylovora(Burrill 1882) Hauben etal.1999 2023-07-20 发布 2023-09-20 实施 新疆维吾尔自治区市场监督管理局 发 布 I DB 65/T 4645—2023 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由乌鲁木齐海关提出。 本文件由乌鲁木齐海关归口并组织实施。 本文件起草单位：乌鲁木齐海关技术中心，石河子大学，成都市标准化研究院，上海海关动植物与 食品检验检疫技术中心。 本文件主要起草人：王种，蒋刚强，陈好娟，巴哈提古丽 ·马那提拜，龙志新，孙燕飞，张小菊， 徐金玉，史茜，刘俊，易建平，谢伟，王均祥，范伟功，王斌，刘秀玲，张飞宇，兰菲，周岩，黄萍。 本文件实施应用中的疑问，请咨询乌鲁木齐海关技术中心。 对本文件的修改意见建议，请反馈至乌鲁木齐海关技术中心(乌鲁木齐市南湖北路116号)、乌鲁 木齐海关(乌鲁木齐市北京南路295号)、新疆维吾尔自治区市场监督管理局(乌鲁木齐市新华南路167 号 ) 。 乌鲁木齐海关技术中心联系电话：0991-4182756;邮编：830063 乌鲁木齐海关联系电话：0991- 3267855;邮编：830011。 新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话：0991-2817197;传真：0991-2311250;邮编：830004 1 DB 65/T 4645—2023 苹果枝枯病菌检疫鉴定方法 1 范围 本文件规定了苹果枝枯病菌检疫鉴定方法的苹果枝枯病菌基本信息、方法原理和检测流程、仪器设 备和主要试剂、检疫鉴定方法、结果判定、样品及资料保存的要求。 本文件适用于蔷薇科植物及其产品在生产、运输过程中对苹果枝枯病菌的检疫鉴定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 苹果枝枯病菌基本信息 4.1 苹果枝枯病菌名称 —— 中文名：苹果枝枯病菌 学名： Erwinia amylovora(Burrill, 1882)Hauben et al.1999 ——英文名： Fire Blight 4.2 分类地位：细菌域 (Bacteria), 变 形 菌 门 (Proteobacteria),γ- 变形菌纲 (Gammaproteobacteria),肠杆菌目 (Enterobacteriales), 肠杆菌科 (Enterobacteriaceae), 欧文氏菌属 (Erwinia)。 4.3 传播途径：染病的繁殖材料(包括种苗、砧木和接穗)、昆虫、鸟、风、雨、灌溉水、修剪工 具、废弃有症状枝条以及被污染的包装材料和运输工具等许多自然因素和人为因素都可引起苹果枝 枯病的传播。其中，染病的繁殖材料、鸟类是苹果枝枯病远距离传播的主要途径。 4.4 苹果枝枯病菌的其他信息参见附录A。 5 方法原理和检测流程 5.1 方法原理 根据苹果枝枯病菌田间危害症状、寄主范围、培养性状、生物学特性及特异性DNA序列，对病原菌 进行分子生物学检测、分离培养鉴定、致病性测定(首次检出阳性需做，后期可选做);快检方法根据 苹果枝枯病菌单克隆抗体与抗原特异性结合进行酶联免疫吸附检测(仅供田间疑似样品的检疫)。 5.2 检测流程 2 DB 65/T4645-2023 典型/可疑植物组织 典型/可疑植物组织 剪碎没泡或研磨组织 胶体金免疫试纸条侠检 (仅做田间疑似样品的检疫) 阴性- 分离培养 呼 疑倾消济 分子生物学检测 (实验宣首次检出阳性需做效病性) 未检出苹果技枯病菌 检出革果枝枯病菌 术检出草果枝秸病菌 分子生物学检测 6 仪器设备和主要试剂 6.1 仪器设备及用具 超净工作台、恒温培养箱、摇床、超低温冰箱、常规冰箱、高压灭菌锅、恒温水浴锅、小型离心机、 高速冷冻离心机、显微镜、 PCR 仪、实时荧光PCR仪、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像系统、制冰机、 电子天平、涡旋振荡器、微量进样器、烘箱等。 6.2 主要试剂 除另有规定外，所有试剂应为分析纯。分子生物学检测所需试剂应符合附录B和附录C的要求，胶体 金免疫试纸条快速检测所需试剂应符合附录D的要求。 6.3 培养基 6.3.1 MMC,培养基配制方法： L- 天门冬酰胺4.0 g,K?HPO