DB32T 4565-2023埃及血吸虫核酸检测 重组酶介导等温扩增法.docxVIP

ICS 11.020 CCS C 62 江 苏 省 地 方 标 准 DB32/T 4565—2023 埃及血吸虫核酸检测 重组酶介导等温扩增法 Detection of nucleic acid of Schistosoma haematobium — Recombinase?aided amplification assay 2023- 09-22 发布 2023- 10-22 实施 江苏省市场监督管理局 发 布 中 国 标 准 出 版 社 出 版 Ⅰ DB32/T 4565—2023 前 言 本文件按照 GB/T 1 .1— 2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由江苏省卫生标准化技术委员会提出并归口 。 本文件起草单位：江苏省血吸虫病防治研究所 、首都医科大学附属北京友谊医院 、江苏省血液中心 、 江苏省国际旅行卫生保健中心（南京海关口岸门诊部）。 本文件主要起草人：杨坤 、赵松 、李伟 、张键锋 、邹洋 、林红 、孙立新 、张乔乔 、黄玉政 、施亮 、王鑫瑶 、 何健 。 1 DB32/T 4565—2023 埃及血吸虫核酸检测 重组酶介导等温扩增法 1 范围 本文件描述了检测人体尿液中埃及血吸虫核酸的重组酶介导核酸等温扩增法 。 本文件适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对埃及血吸虫核酸的检测 。 注：埃及血吸虫的基本信息 、流行病学及临床表现见附录 A。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中 ，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件 。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1 重组酶介导核酸等温扩增技术 recombinase-aided amplification；RAA 一种利用重组酶 、单链结合蛋白和 DNA 聚合酶在等温条件下（一般为 39 ℃)进行核酸扩增的技术 。 注：其原理为重组酶与引物紧密结合扫描双链 DNA，当搜索到与引物同源的序列时 ，使双链 DNA 解旋 ，单链结合蛋 白防止单链 DNA 复性，引物在 DNA 聚合酶作用下沿模板链延伸，合成新的 DNA 互补链，5 min~15 min 就可实 现用仪器检测目的靶标的扩增 。 4 仪器与设备 4.1 RAA 恒温核酸扩增检测仪 带有恒温（39 ℃±1 ℃)扩增功能的荧光检测仪 。荧光检测激发波长 480 nm，发射波长 520 nm 。 4.2 恒温振荡混匀仪 带有恒温功能（39 ℃±1 ℃),且能把固体 、液体物质充分混匀 。 4.3 离心机 相对离心力≥1 500 g。 4.4 微量可调移液器 量程为 100 μL~1 000 μL、20 μL~200 μL、2 μL~20 μL 及 0 .5 μL~10 μL 。 2 DB32/T 4565—2023 5 试剂与材料 5.1 试剂 体液核酸提取试剂盒 、RAA 扩增反应体系及缓冲液（也可采用等效的商品试剂盒）、无水乙醇和水 （符合 GB/T 6682 的要求）。 5.2 材料 离心管（50 mL、1 .5 mL）及离心管架 、PCR 管（0 .2 mL）及管架 、微量可调移液器配套吸头 、一次性使 用敷料镊 、一次性医用手套和一次性医用口罩 。 5.3 引物与探针 扩增埃及血吸虫细胞色素 C 氧化酶相关基因（COX1）基因的特异性引物及探针，如表 1 所示 。 表 1 埃及血吸虫 COX1 基因引物与探针 引物/探针 序列（5?3） 正向引物 CTTGATTATATATGCTTAAAAGCTGTGGGTC 反向引物 TAAAGCTATACCAGTAACACCACCTATCGT 探针 a CTGTGGGTCTCGTGTATGAGATCCTATAGTTTGATGATTGGTTGGTTTTA a 探针序列的第 31 位碱基修饰荧光报告基团羧基荧光素（FAM）、第 35 位碱基修饰淬灭基团以及第 33 位碱基修饰 四氢呋喃残基 。 6 样本前处理与核酸提取 6.1 样本 样本为受试者尿液 。 6.2 样本采集 6.2.1 登记受检者编号信息，将样本信息贴于洁净尿液收集容器上 。 6.2.2 采集受检者上午 10 点至下午 2 点之间的尿液，避免粪便污染，女性应避开生理期留取尿液样本 。 6.2