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北虫草菌种制作技术规程 1 范围 本文件规定了北虫草母种、原种和栽培种生产有关的术语和定义、生产要求、菌种制备、检验、贮 存技术流程要点。 本文件适用于北虫草母种、原种、栽培种菌种制作。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 5749 生活饮用水卫生标准 GB/T 12728 食用菌术语 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 3 术语和定义 GB/T 12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 北虫草 cordyceps militaris 又称蛹虫草、 虫草花、蛹草菌等，属于真菌门、子囊菌亚门、子囊菌纲、肉座菌目、麦角菌科、 虫草属。 3.2 菌种spawn 生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。 3.3 液体菌种 liquid spawn 是用液体培养基在生物发酵罐中，通过深层培养技术生产的液体形态的食用菌菌种。 3.4 母种 stock culture 1 经分离、纯化、杂交、诱变等各种方法选育得到的具有结实性菌丝培养物及其继代培养物，也称试 管种。 3.5 原种 preculture spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称为一级液体菌种。 3.6 栽培种 spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称为二级液体菌种。 4 生产要求 4.1 技术人员 菌种生产应配备与生产菌种级别相应的技术人员。母种技术人员需有五年以上实践经验，原种和栽 培种技术人员需有三年以上实践经验。 4.2 场地选择 4.2.1 选址 选择地势高，交通便利，通风良好，便于供排水。 4.2.2 环境卫生 要求200 m之内无畜禽养殖场、无垃圾场、无污水和其它污染源，远离北虫草种植区，尤其是远离 北虫草栽培废弃物晾晒场，用水符合GB/T 5749相关规定。 4.3 基础设施、设备 4.3.1 厂房设置 应设置原材料库、配料室、分装室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室、贮存室、菌种检验室等。 4.3.1.1 原材料库 通风、防雨、防潮、防虫、防鼠、防火、防杂菌污染等。 4.3.1.2 配料室、分装室 水电便利，通风良好、空间充足，配有磅秤、天平、搅拌机、分装器等。 4.3.1.3 灭菌室 水电安全便利、通风良好、空间充足，配有高压灭菌锅或灭菌柜、消防等设施。如果使用煤、天然 气加热，要求灭菌设施的出料门与加热灶有隔断设施。 2 4.3.1.4 通风室 设在冷却室与接种室的相临处，室内刷防尘漆或其它防尘材料，配有无菌通风和制冷设备。 4.3.1.5 冷却室及接种室 洁净、防尘，接种室门口设缓冲间或必要喷雾等灭菌设施，配有超净化工作台、接种枪、高压泵、 酒精灯、紫外线杀菌灯、耐腐蚀剂的防火设备等。 4.3.1.6 培养室 洁净、水电畅通、通风良好，配有恒温培养箱或培养架、摇床、发酵罐、空调、杀菌设备等。 4.3.1.7 菌种检验室 水电通畅，配有显微镜、pH计、菌落计数器等。 4.4容器 4.4.1母种 常用玻璃试管 （18 mm×180 mm或20 mm×200 mm），试管塞带有砂芯或者不带砂芯的硅胶塞。 4.4.2原种 常用1500 mL～2000 mL、耐高温高压的无色带盖玻璃瓶、聚丙烯塑料瓶，或不同容积规格发酵罐。 4.5原料 葡萄糖、蛋白胨、硫酸镁、磷酸二氢钾等化学试剂，马铃薯、小麦、麦麩等要求新鲜、干燥、无虫、 无霉变。 5 菌种制备 5.1 培养基配方及分装 5.1.1母种 配方为马玲薯 200 g (煮汁)、葡萄糖 20 g、琼脂 20 g、蛋白胨5 g、牛肉膏0.5 g、酵母粉5 g、 磷酸二氢钾1g、硫酸镁0.5 g，水 1000mL，pH6.5～7.0。分装至试管中，分装量应掌握在试管长度的 1/4。 5.1.2原种 配方为马玲