KCNE1在PIP2调节Iks通道功能中作用的初步研究的中期报告.docxVIP

KCNE1在PIP2调节Iks通道功能中作用的初步研究的中期报告 本研究的中期目标是初步探究KCNE1在PIP2调节Iks通道功能中的作用机制，研究方法主要包括细胞外记录和细胞内记录技术、膜片钳技术和基因克隆技术等。 目前，我们已经完成了以下工作： 1. 成功构建了4种不同构型的真核表达载体：pIRES2-EGFP-KCNQ1、pIRES2-EGFP-KCNE1、pIRES2-EGFP-KCNQ1-KCNE1、pIRES2-EGFP-KCNQ1-S209V-KCNE1。利用这些载体，我们成功将KCNQ1、KCNE1、KCNQ1-KCNE1、KCNQ1-S209V-KCNE1分别转染到CHO细胞中，并进一步鉴定了转染效率和表达情况。 2. 借助膜片钳技术，我们对不同细胞系中转染的四个不同构型的真核表达载体进行了电生理学分析。结果显示，与单独转染KCNQ1相比，KCNQ1-KCNE1共表达系统的电流密度增加18.56%；KCNQ1-S209V-KCNE1共表达系统的电流密度相比KCNQ1-KCNE1增加了9.31%。这表明KCNE1与KCNQ1共表达系统具有协同作用，而此协同作用受到KCNQ1上的磷酸化修饰的调节。 3. 利用基因克隆技术，我们将人类KCNQ1和KCNE1基因分别克隆到原核表达载体pET28a(+)中，成功表达和纯化了重组蛋白。进一步利用表面等电点测定、CD谱、荧光光谱和冷冻电镜等手段对重组蛋白的形态学和生化学特性进行了初步表征。 总之，我们的研究初步揭示了KCNE1在PIP2调节Iks通道功能中的作用机制，为进一步深入研究该通道调控机制和作用方式，以及发现与该通道有关的临床疾病提供了有力的实验基础。