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抑制素重组融合蛋白的原核表达新技术研究的中期报告 中期报告：抑制素重组融合蛋白的原核表达新技术研究 研究背景： 抑制素是一种可在细胞内逆转蛋白酶体蛋白酶的活性的蛋白质，具有重要的生物学功能。在疾病治疗和基因工程药物开发中，抑制素的应用越来越广泛。目前，抑制素的获得主要依赖于重组蛋白技术。然而，采用常规的原核表达系统表达抑制素蛋白时，会因为蛋白的毒性和抑制素的蛋白质折叠复杂性而面临到一些挑战。因此，开发一种高效的抑制素表达系统具有重要的意义。 研究内容： 本研究采用了一种新的重组蛋白表达技术，将抑制素的表达转化到了核酸酶T7的转录-翻译体系中。具体的操作流程如下： 1. 利用PCR克隆抑制素基因的编码序列并融合T7流感素标签序列。 2. 将克隆得到的抑制素融合基因插入PET28a质粒中，并用大肠杆菌DH5α菌株进行扩增。 3. 用IPTG诱导原核细胞表达，同时注入了核酸酶T7，将PET28a中的融合基因进行转录、翻译。 4. 用Ni2 +亲和层析法分离目标蛋白。 研究结果： 采用上述方法成功表达了抑制素重组融合蛋白。通过SDS和Western blot技术分析，得到了目标蛋白的分子质量和纯度，并通过ELISA技术进一步验证了蛋白质的酶活性。 研究结论： 本研究通过将抑制素的表达转化到核酸酶T7的转录-翻译体系中，成功获得了抑制素重组融合蛋白。该技术具有高效、简单、经济的优点，将有助于抑制素的大规模生产和应用。