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温里药配伍对少腹逐瘀汤活血化瘀效应的影响 少阴郁经汤是清代王清仁的医林改革错误。它的意思是“金钱匮乏”，即“轻金轻豆”加热经典汤，然后减少笑着制作。方中小茴香、干姜、官桂温经散寒,通达下焦;元胡、没药利气散瘀,消肿定痛;蒲黄、五灵脂活血祛瘀,散结止痛,其中蒲黄生用,重在活血祛瘀,五灵脂用炒,重在止痛而不损胃气;当归、川芎乃阴中之阳药,血中之气药,配合赤芍用以活血行气,散滞调经。全方能温经散寒、活血祛瘀、消肿止痛。可见,少腹逐瘀汤用药配伍特点在于以温热、辛甘药物为主,归经以脾(胃)、肝(胆)经为主,使全方温阳通经,调气活血。方中小茴香、干姜、肉桂为佐药,温经散寒,理气止痛,并起到引诸药直达少腹的作用。但尚未报道温里药味配伍对全方效应的影响作用的研究。 本文在前期研究工作基础上,采用大鼠急性血瘀模型及体外对家兔血小板聚集及凝血酶时间等指标评价温里药物小茴香-干姜-肉桂配伍对少腹逐瘀汤活血化瘀效应的影响,为揭示少腹逐瘀汤配伍效应、配伍机制及作用机制的深入研究提供一定的科学依据。 1 材料表面 1.1 药品、药材与仪器 少腹逐瘀汤组方:当归、川芎、赤芍、蒲黄、肉桂、小茴香、五灵脂、没药、干姜、延胡索等10味,经本文作者段金廒鉴定,符合《中国药典》(2005年版)项下标准。其中当归、川芎药材分别来源于甘肃岷县当归GAP种植基地和四川彭州川芎GAP种植基地,其余均购自于南京市药材公司。盐酸肾上腺素(Adr)注射液,天津金耀氨基酸有限公司(批号0808231);枸橼酸钠,天津市生物化学制药厂(批。凝血酶时间测定试剂盒(TT冻干品),凝血酶(批号STG10301-29),缓冲液(批号STG20302-29);凝血酶原时间测定试剂盒(PT干粉),凝血活酶(批号ST,缓冲液(批号STG20102-41);纤维蛋白原含量测定试剂盒(Clauss法),FIB凝血酶(批号STG20401-26),咪唑缓冲液(批号STG300402-16)。ADP,北京中勤世帝科学仪器公司。部分活化凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒(鞣花酸),上海太阳生物技术有限公司(批号312085)。 1.2 g-r-80电脑血液黏度测试方法 Anke(TDL240B)离心机(上海安寿科学仪器厂);LG-R-80电脑血液黏度测试仪(北京世帝科学仪器公司产品);LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析仪(北京世帝科学仪器公司);ECL2010全自动电化学发光免疫分析仪。 1.3 物繁殖场提供许可证 雄性家兔,体重2～2.5 kg,由南京江宁县汤山青龙山动物繁殖场提供,许可证号SCXK(苏)2007-0008。SD雌性大鼠,体重(200±10)g,由南京医科大学实验动物中心(SPF级)许可证号SCXK(苏)2002-0031。 2 方法 2.1 样品的制备 2.1.1 小炔香、延胡索没药样品sf的合成 称取少腹逐瘀汤组方药材(5.00 kg),按照当归∶川芎∶赤芍∶蒲黄∶五灵脂∶肉桂∶干姜∶小茴香∶延胡索∶没药3∶2∶2∶3∶2∶1∶0.2∶0.5∶1∶2比例配比,加10倍量蒸馏水合煎2次,每次1 h,合并2次滤液,5 000 r·min-1离心5 min,60℃减压浓缩干燥,得样品1(SF)。 2.1.2 其他药品配比对“sf-wl”型人工党组织药-学考察结果 称取少腹逐瘀汤组方药材减去温里药组(小茴香、肉桂、干姜,4.5 kg),其他药物配比同2.1.1,加10倍量蒸馏水合煎2次,每次1 h,合并2次滤液,5 000 r·min-1离心5 min,60℃减压浓缩干燥,得样品2(SF-WL)。 2.2 adp诱导剂对贫血小板的血浆prp的制备 新西兰大耳白兔,雄性,10只,禁食8 h后,戊巴比妥钠麻醉,颈动脉插管放血,按枸橼酸钠(3.8%)1∶9抗凝,以800 r·min-1离心10 min,取上层富血小板血浆(PRP),剩余部分以3 000 r·min-1离心10 min,取贫血小板血浆(PPP)。测试杯通道加入搅拌珠,加受试药物10μL,再加250μL PRP。对照组加入等量溶解样品溶液,温育3 min,放入测试通道,加10μL ADP诱导剂,终浓度为5μmol·L-1。用PPP(加入与待测样本相同的药物10μL,消除药物自身颜色影响)调零,对照组加入等量的溶解样品溶液,用LG-PABER-1型血小板聚集凝血因子分析仪测定血小板6 min内的最大聚集率,并按下述公式计算药物对血小板聚集的抑制率。 2.3 凝血酶活性测定 取新西兰大耳白兔,雌雄各半,禁食8 h后,戊巴比妥钠麻醉,颈动脉插管放血,按枸橼酸钠(3.8%)1∶9抗凝,以3 000 r·min-1离心10 min,吸取上层,制备待测血浆。在测试杯每个通道中加入搅拌珠,加10μL