纤维素降解菌的筛选和纤维素酶基因的克隆表达的中期报告.docxVIP

纤维素降解菌的筛选和纤维素酶基因的克隆表达的中期报告 一、研究背景和意义 纤维素是植物细胞壁的主要成分，存在于大量的天然生物质中，如木材、草渣、秸秆等。纤维素对于工业和农业产业发展有着重要的战略意义。由于其结晶度高、形态复杂以及化学键强，造成其难以被生物降解利用，甚至在自然环境中也需要数年至数十年的时间才能被分解。各种微生物通过分泌纤维素酶来降解纤维素，其中纤维素降解细菌可分为几十个科和几百个属，其降解能力和特异性十分丰富，亟待深入研究。 因此，开展纤维素降解菌监测、筛选及其纤维素酶基因的克隆表达具有很强的实际应用价值和多学科交叉的科学意义。 二、研究内容和方法 目前，已经从多种环境样品中分离到了大量的纤维素降解菌株，其分离培养的操作步骤为纤维素为唯一碳源的培养基或半固体培养基。本研究选择天然森林土壤为环境样本，生物发酵技术和分子生物学技术是本研究的核心技术手段。 1. 筛选纤维素降解菌菌株 将采集的天然森林土壤高温烘干灭菌后，分别取自然环境样品中的不同深度和不同样点处表层土壤进行分离和筛选。采用滤纸分离法对土壤样品进行悬浮液制备，再通过涂布、稀释、营养基筛选、测定清除圆中心直径等方法对纤维素降解菌进行筛选。从观察到的穿透青田霉属菌落中，随机挑取上清液，通过固定液浸泡法将菌株固定于固载体曲酸琼脂上，挑出生长良好的单菌落并纯化培养。 2. 基因克隆和表达 从筛选得到的纤维素降解菌的基