重组人cTnI优化表达和纯化工艺建立及其抗体制备的中期报告.docxVIP

重组人cTnI优化表达和纯化工艺建立及其抗体制备的中期报告 本研究旨在优化重组人心肌肌钙蛋白I（cTnI）的表达和纯化工艺，并建立制备cTnI抗体的方法。本次报告为中期报告，介绍了目前已完成的工作和结果。 首先，我们构建了一个重组cTnI表达系统，并对其进行了优化。在不同条件下进行重组cTnI的表达试验后，发现将温度控制在18℃、诱导时间为12小时、induction concentration为0.5 mM IPTG时，cTnI表达量最高。 接着，我们对纯化工艺进行了研究。我们采用了大孔树脂Affi-Gel Blue进行离子交换色谱层析，在pH 7.0下以3mol/L NaCl梯度洗脱，最终得到了纯度为98％的cTnI。此外，我们还将蛋白质通过10kDa截止膜过滤器进行浓缩，在使用Superdex G75进行尺寸排阻层析后，得到了分子量约为23kDa的重组cTnI，表明纯化得到的重组cTnI具有阳性活性。 最后，我们进行了cTnI抗体制备试验。我们将纯化得到的重组cTnI注射到小鼠体内，收集其血清制备cTnI抗体。在ELISA实验中发现，该抗体能够专一性地识别cTnI。 综上所述，我们成功地建立了重组cTnI表达和纯化的方法，并制备出了能够识别cTnI的抗体。下一步我们将继续进行抗体的分析和应用研究，以探索cTnI在心肌病理生理学中的作用。