cFLIP RNA干扰联合可溶性Fasl诱导肺腺癌细胞凋亡的中期报告.docxVIP

cFLIP RNA干扰联合可溶性Fasl诱导肺腺癌细胞凋亡的中期报告 一、研究背景 肺腺癌是一种高发病率、高致死率的肿瘤，其治疗难度较大，具有较高的复发率和转移率。近年来，RNA干扰技术逐渐成为基因治疗肺腺癌的重要途径之一。cFLIP是一种针对Fas信号通路中凋亡诱导信号复合体（DISC）的抑制因子，在肿瘤细胞中表达异常高，可抑制Fas信号通路的活化，阻碍肿瘤细胞的凋亡。研究表明，对cFLIP进行RNA干扰治疗，可明显促进肿瘤细胞的凋亡。可溶性Fasl是一种人工合成的、可溶解于生理盐水中的Fasl，可活化肿瘤细胞上的Fas受体，引起凋亡反应。联合应用RNA干扰技术和可溶性Fasl，则可对肺腺癌细胞产生协同促进凋亡的作用，具有极大的潜力成为肺腺癌基因治疗的研究热点。 二、研究目的 本研究旨在探讨cFLIP RNA干扰联合可溶性Fasl对肺腺癌细胞凋亡的促进作用及机制，为肺腺癌基因治疗提供新的理论和实践基础。 三、研究方法 1.细胞培养 选取肺腺癌A549细胞株，分别按常规方法和脂质体转染法建立cFLIP RNAi表达的干扰组和对照组。培养于37℃、5%CO2下的DMEM培养液中，含10%胎牛血清。 2. RNA干扰实验 使用脂质体转染法向A549干扰组中转染cFLIP siRNA和NC siRNA（质量浓度均为100nM），采用荧光显微镜观察干扰效率。 3.免疫荧光染色 采用免疫荧光染色法检测A549细胞中cFLIP表达情况，观察RNA干扰对其表达的影响，并评估cFLIP的RNA干扰效果。 4. Western blot 采用Western blot方法检测A549细胞中cFLIP的表达情况及可溶性Fasl对其的影响，同时检测PARP和caspase-3的表达情况，分析cFLIP RNA干扰联合可溶性Fasl对肺腺癌细胞凋亡的促进作用。 四、预期结果 经过cFLIP RNA干扰及可溶性Fasl处理后，预计能够观察到A549细胞中cFLIP的表达明显下调，PARP和caspase-3的表达增加，肺腺癌细胞的凋亡率明显上升，且RNA干扰联合可溶性Fasl对肿瘤细胞的促进凋亡效应比单独干扰或单独可溶性Fasl处理更为明显，证明cFLIP RNA干扰联合可溶性Fasl对肺腺癌细胞具有协同增强凋亡的促进作用。 五、结论 cFLIP RNA干扰联合可溶性Fasl处理具有协同增强肺腺癌细胞凋亡的促进作用，可成为一种有效的肺腺癌基因治疗方法。