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lc-esi-ms法分析鉴定预知子中的皂苷类成分 预知子是木通科植物的木通a.iiiiida（thunb.）和三叶木通a.trifoliata（thunb.）koidz或白木通a.threat（thunb.）koidz。具有平肝理气、活血止痛、结血利尿的功效。它用于治疗宫颈肿胀和疼痛、痛经、粘膜上肿瘤和排尿不畅。现代药理表明,预知子具有利尿、抗菌、消炎和抗肿瘤等作用。文献报道预知子中的主要化学成分为皂苷类化合物,目前预知子化学成分研究以传统的化学分离报道居多,或者采用高效液相色谱法对预知子中多种成分的量进行研究。有文献报道,不同品种来源的预知子质量存在较大差异。本实验以安徽产预知子为研究对象,采用高效液相色谱-电喷雾质谱(HPLC-ESI-MS)联用技术,快速简捷地鉴定了预知子提取物中的17个皂苷类成分和2个未知化合物,为预知子的药效物质基础和作用机制研究奠定了基础。 1 数据处理系统 Finnigan LCQ Fleet离子阱液相色谱-质谱联用仪(美国Thermo-Finnigan公司,包括Finnigan Spectra System P4000泵;Xcalibre 210数据处理系统);Millipore-Simplicity超纯水处理系统。甲醇、乙腈为色谱纯(美国Fisher公司),甲酸铵(美国Fisher公司);水为自制超纯水。saponin X、saponin B、saponin PD、saponin A等对照品为本实验室自制,经HPLC-UV法测得质量分数均大于98%。 预知子于2011年9月采自安徽大别山,经江西中医学院刘庆华教授鉴定为木通科植物三叶木通Akebia trifoliate(Thunb.)Koidz.的干燥近成熟果实。 2 实验方法 2.1 铬和铬的形成 2.1.1 流动相、柱温 色谱柱为TSK-GEL ODS-80Ts QA C18(150 mm×2 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-5 mmol/L甲酸氨溶液(B),梯度洗脱:0~25 min,0~10%A;25~35 min,10%~30%A;35~60 min,30%~50%A;体积流量0.2 m L/min;柱温为室温;进样量10μL。 2.1.2 离子陷阱条件 ESI源,负离子检测模式。扫描范围m/z:100~1 500。离子阱条件为喷雾电压3.2k V;壳气(N2):25 L/min;辅助气(He):3 L/min;离子传输管温度320℃;离子传输管电压-8 V;套管镜头电压-125 V。 2.2 样品的制备 2.2.1 供试品溶液的制备 准确称取预知子粉末(过1号筛)25 g,以8倍量的70%乙醇提取2次,每次1.5 h;合并2次提取液,减压浓缩,浓缩至50m L,浓缩液4 500 r/min离心10 min,取离心后的沉淀,干燥,得预知子提取物;精密称取0.1 g预知子提取物,甲醇溶解并定容至100 m L,作为供试品溶液。进样前过0.22μm微孔滤膜。 2.2.2 混合对照品溶液 分别精密称取saponin PK、saponin D、saponin X、saponin B、saponin PD、saponin A对照品0.002 0、0.002 1、0.002 0、0.002 1、0.002 1、0.002 2 g,用初始比例的流动相定容至25m L,并超声溶解,配制成质量浓度为0.08 mg/m L的混合对照品溶液。进样前过0.22μm微孔滤膜。 2.3 tic谱图分析 取“2.2”项下的供试品及对照品溶液,按照上述液相和质谱条件分别进行LC-MS分析,得到各样品的总离子流色谱图(TIC),见图1。与空白对照溶液相比,预知子提取物供试品溶液的TIC谱图中出现了17个明显的色谱峰,按照出峰的先后顺序将其标示为1~17。在TIC中,谱峰13给出m/z 735和749的[M-H]-准分子离子峰,谱峰12给出m/z911和1 009的[M-H]-准分子离子峰谱峰,1~11和14~17依次给出m/z 1 089、1 381、1 219、1 073、1 059、927、1 219、1 089、911、911、749、603、749、765和733的[M-H]-准分子离子峰。初步推断预知子提取物中17个主要单体成分及2个未知的化合物。 3 ms2及ms3裂解分析 通过LC-MS分析给出准分子离子峰,得到化合物相应的相对分子质量信息。ESI-MSn能够得到化合物的多级裂解质谱,为化合物的结构解析提供丰富的信息。三萜皂苷类成分的多级质谱裂解规律表明,在碰撞能的作用下,三萜皂苷主要发生糖苷键的断裂,质谱给出失去一个或多个糖的次级苷和苷元的碎片离子。预知子提取物中的皂苷类成分依据其母核的不同,裂解形成的皂苷元主要为常春藤皂苷元及少量齐墩果酸、阿