大田软海绵酸多克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立的中期报告.docxVIP

大田软海绵酸多克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立的中期报告 一、背景 大田软海绵（Aurantiochytrium limacinum）是一种单细胞真菌，广泛存在于海洋环境中，是生产微藻类油脂的重要菌种。然而，由于其生长速度慢，生产成本高等原因，仍然存在着产业化应用的瓶颈。因此，需要对其生长过程中的关键酶进行深入研究，以便优化培养条件和提高产量。 其中一种关键酶便是软海绵酸合酶（DHA-ACP合酶），它参与DHA（二十二碳六烯酸）在软海绵细胞内的生物合成过程。因此，研究软海绵酸合酶的功能及调控机制对于提高软海绵酸产量具有非常重要的意义。 针对软海绵酸合酶的研究需要一种高特异性的抗体，以便对该酶进行检测及定量。因此，本研究计划针对软海绵酸合酶进行多克隆抗体制备，并建立间接ELISA方法进行检测。 二、实验设计 1.软海绵酸合酶的表达和纯化 首先，利用软海绵酸合酶的基因序列合成其表达载体，并将其转染至E. coli中进行表达。随后，利用柱层析技术对其进行纯化。 2.抗原制备 将获得的纯化重组软海绵酸合酶作为抗原，将其与免疫佐剂混合后注射至小鼠体内进行免疫。 3.特异性筛选 将获得的小鼠血清以及免疫后获得的淋巴细胞与酶联亚硫酸酯（ELISA）板上载有软海绵酸合酶进行特异性筛选和检测。 4.多克隆抗体制备 根据特异性筛选结果，从免疫小鼠体内获得特异性的淋巴细胞，进行细胞融合，并筛选对软海绵酸合酶特异性较高的杂交瘤。 5.ELISA方法的建立 利用得到的多克隆抗体建立间接ELISA方法，用于软海绵酸合酶的检测和定量。 三、目前进展 1.软海绵酸合酶的表达和纯化 已成功合成软海绵酸合酶的表达载体，并完成其在E. coli中的表达。随后利用手性柱层析技术对其进行了纯化，得到较为纯净的软海绵酸合酶样品。 2.抗原制备 已完成对获得的纯化重组软海绵酸合酶进行了动物免疫实验，正在等待获得小鼠血清及淋巴细胞。 3.特异性筛选 已经准备了ELISA板以及软海绵酸合酶的标准品，并根据标准浓度进行了处理。目前正在等待小鼠免疫后获得血清及淋巴细胞，以进行特异性筛选。 4.多克隆抗体制备 目前还未开始。 5.ELISA方法的建立 目前还未开始。 四、预期结果 通过本研究，我们期望能够成功制备出针对软海绵酸合酶的高亲和力多克隆抗体，并建立出间接ELISA方法，用于软海绵酸合酶的定量检测。同时，本研究还将有助于深入探究软海绵酸合酶的功能及调控机制，为软海绵酸产量的提高提供重要的理论和技术支持。