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随机实验与重复实验 实验设计是科学研究的重要组成部分。良好的实验设计是顺利进行科学研究和数据分析的先决条件，也是获得预期结果的重要保证。科学研究的目的, 是为了揭示事物的客观规律。研究的价值首先决定于研究的目的, 而研究的结果是通过一定方法步骤而获得的。一个周密的实验研究全过程, 通常要联系质的特性, 研究量的表现, 所以从统计方面讲, 主要应考虑随机、对照、重复、均衡等问题, 这是实验研究的一般原则。实验要求一定重复数 (样本例数) , 其目的是使均数逼真, 并稳定标准差, 只有这样来自样本的统计量才能代表总体的参数, 统计推断才具有可靠的前提。 1 测量量的测量 重复通常有三层含义, 即“重复取样”、“重复测量”和“重复实验”。从同一个样品中多次取样, 测量某定量指标的数值, 称为“重复取样”, 目的是看各标本中某定量观测指标含量的分布是否均匀;对接受某种处理的个体, 随着时间的推移, 对其进行多次观测, 称为“重复测量”, 目的是看定量指标随时间推移 (或部位改变) 的动态变化情况;实验设计中所讲的重复原则指的是“重复实验原则”, 即在相同的实验条件下的独立重复实验的次数足够多。这里的“独立”是指要用不同的个体或样品做实验, 而不是在同一个体或样品上做多次实验。 2 随机实验的概念 当人们关心的实验结果是一个不能事先准确判定的某种结局时, 一般称其为“随机变量”的一种具体表现, 如某种药物治疗某种骨病的患者, 其结果可能是“治愈、显效、好转、无效、死亡”之一, 事先谁也说不准。具有随机性结果的实验研究统称为“随机实验”, 要想比较正确地反映随机实验结果出现的一般规律, 必须进行大量的独立重复实验。又如, 投掷1枚质地均匀的硬币实验, 看其结果是正面朝上还是反面朝上, 投掷1次或10次, 其结果都是随机的, 而投掷10万次, 则正面朝上或反面朝上的机会接近相等, 约为0.5。当然, 在实际的科研工作中, 在一个特定的条件下不可能做无数次独立重复实验, 做好结合具体情况作出合理的估计, 一般来说, 不做重复实验或仅重复2、3次实验, 其可靠性是值得怀疑的。 3 mtt反应中的压力变化 例1《骨髓间质干细胞体外定向诱导分化为软骨细胞的实验研究》一文, 抽取兔髂骨骨髓液 (3月龄新西兰兔, 雌雄不限, 体质量2～2.5 kg) , 经梯度离心法和贴壁法进行体外培养, 贴壁细胞传代, 取第3代细胞在培养基中添加软骨分化诱导剂[转化生长因子 (TGFβ2) 10 ng/ml、地塞米松10-7mol/L、维生素C 50μmol/L], 经7、14、21 d诱导培养后, 倒置显微镜观察细胞形态, 免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达。将软骨细胞与软骨支架材料———聚磷酸钙纤维/左旋聚乳酸 (CPP/PLLA) 聚合, 1周后终止培养, 扫描电镜观察细胞黏附情况。诱导后细胞体外扩增能力显著降低, 细胞形态由成纤维样梭形向多角形、多边形或类圆形转变, 诱导21 d后细胞形态变化最为显著, Ⅱ型胶原免疫组化染色深而均匀。诱导后的骨髓间充质干细胞可在支架材料内良好黏附生长。结论为体外培养的骨髓间充质干细胞可定向诱导分化为软骨细胞, 分泌软骨细胞特异性基质, 可用作软骨组织工程的种子细胞。 例2《间歇性压力培养环境对兔骨髓基质干细胞增殖的影响》一文, 以1只出生1个月的新西兰兔的骨髓基质干细胞为实验材料, 将生长良好的第3～4代MSC按1×104个/孔随机接种于4块24孔培养板, 14 h后细胞完全贴壁, 换新鲜含10%胎牛血清的DMEM (含1 U/L青霉素及100 ms/L链霉素) 。按压力施加类型不同分为持续性和间歇性压力, 每块培养板的细胞为1个大组, 随机将4块培养板分为4个大组即:对照组、20 kPa间歇组、60 kPa间歇组、100 kPa间歇组。每大组按观察期分为4个小组即:1、3、5、7 d组, 每小组样本 (细胞) 为6孔。对照组不予加压, 20、60、100 kPa间歇组分别在每天施以20、60、100 kPa的压力5 min 2次。结果:MSC在60、100 kPa间歇性压力培养环境下MTT反应的OD值小于对照组;压力值越大, OD值越小 (P0.05) 。而20 kPa间歇性压力情况可显著促进MSC增殖, 并随时间增加而增强。在实验第7天时, 实验组OD值高于对照组 (P0.05) , 差异有显著性意义。结论为关节置换术后早期下地活动产生的较大应力, 会明显抑制骨髓腔内MSC的增殖, 不利于骨的重建愈合, 临床应当避免。然而, 较小的间歇性压力对MSC增殖有明显的促进作用, 提示关节置换患者可在较小压力范围 (20 kPa) 内进行早期关节被动活动训练, 有利于关节术后骨的重建愈合。 辨析:上述2例的实验设计不正