《化工分析》 课件 项目十一 高效液相色谱法.pptx

项目十一 高效液相色谱法;;该项目有 2 个代表性工作任务。 阿莫西林是一种最常用的半合成青霉素类广谱抗生素，杀菌作用强，穿透细胞膜的能力强，是目前应用广泛的口服半合成青霉素之一，对其分散片有效成分的检测是药品质量监管的重要工作。;阿莫西林的含量测定方法按照 《 中国药典》 ( 2020 年版，二部) ，采用高效液相色谱法。 高效液相色谱分析方法是以液体为流动相，借助高压输液泵获得相对较高流速、流量或压力恒定的液体以提高分离速度，采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种分析方法。;技术上，流动相改为高压输送，输送压力可高达 30 ~ 60 MPa，流速一般可达 1 ~ 10 mL / min。使分析时间大大缩短，复杂试样一般少于 1 h。色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使色谱柱的柱效大大提高。由于广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度，如荧光检测器灵敏度可达 10 - 11 g。另外，试样用样量少，一般为几个微升。所以高效液相色谱法具有高压、高速、高效、高灵敏度、适用范围广、试样用量少等特点。;【知识、技能与素养】;任务一　 认识高效液相色谱仪;1. 高效液相色谱仪。 2. 减压过滤装置 ( 配 0. 45 μm 有机滤膜) 。 3. 超声波发生器。 4. pH 计 ( 配标准化生成的 pH 值为 6. 86、4. 00 的标准缓冲溶液) 。 5. 微量进样器 ( 平头进样针、100 μL，配 0. 45 μm 过滤头) 。 6. 实验室常用玻璃仪器。;530;根据实验室提供的高效液相色谱仪，完成表的有关信息。;高效液相色谱仪基本组成系统如图所示。;一、高压输液系统 高压输液系统一般包括储液器、高压输液泵、过滤器以及梯度洗脱装置等。高压输液泵是高效液相色谱仪的关键部件，其作用是将流动液体以相对稳定的流速或压力输送到色谱柱。高压输液泵按输液性能可分为恒压泵和恒流泵两类。目前，高效液相色谱仪普遍采用的是往复式恒流泵，特别是双柱塞型往复泵，具有液路缓冲器，可获得较高的流量稳定性，尤其适用于梯度洗脱。串联式柱塞往复泵部分可视部件如图所示。;534;串联式柱塞往复泵的工作原理如图所示。;并联式柱塞往复泵部分可视部件如图所示。;并联式柱塞往复泵的工作原理如图所示。;凸轮输液泵 CAD 模型如图 所示。凸轮定位及脉动阻尼功能，可实现低流量的稳定输出。;凸轮输液泵工作原理如图所示。;输液系统还有一个重要功能是按程序设计，改变不同流动相的配比，一般是在分离过程中逐渐改变流动相组成，使流动相的强度 ( 或极性) 逐渐增强，从而达到分离复杂混合物组分的目的，这就是 “梯度洗脱”。梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗提。梯度洗脱可以缩短分析周期，提高分离能力，改善峰型，提高检测灵敏度，但有时会引起基线漂移和降低重现性。 梯度洗脱分为低压梯度和高压梯度。低压梯度又称为外梯度，是在低压状态下将两种或两种以上的流动相输入比例阀，混合后再由高压泵吸入增压输送到色谱柱，原理如图所示。;541;高压梯度是依靠每种流动相各自的高压泵将流动相增压后送入混合器，进行混合后再送入色谱柱。其原理如图所示。;四元高压梯度洗脱液相系统配置如图所示。;二、进样系统 进样系统是将试样准确定量地送入色谱柱。进样系统分为手动进样和自动进样。手动进样器包括进样瓶、平头进样针和六通阀。进样瓶和平头进样针如图所示。;六通进样阀使用原理如图所示，先将阀柄置于采样位置 (LOAD)，用平头进样针注入试样，多余的试样自动溢出。然后将六通阀手柄顺时针转动 60°至进样位置 ( INJECT)，流动相与定量管接通，样品被流动相带到色谱柱进行分离。;六通进样阀实物图片如图所示。 自动进样器由计算机编程控制多个样品自动进样，适用于批量样品分析。;三、分离系统 分离系统的关键部件是色谱柱。色谱柱一端接进样器，一端接检查器。色谱柱实例如图所示。;为了保护色谱柱，在色谱柱入口端接入装有与色谱柱相同固定相的短柱 (5 ~ 30 mm长) ，其可以方便地更换。 为了提高色谱柱柱效，改善色谱峰分离度，使峰形变窄，缩短保留时间，保证结果的准确性和重复性，可以为色谱柱配备恒温箱。 新型柱温箱采用交流电相位调制方式，功率控制可精确到 1 / 65 000，结合数字 PID 整定技术，升温时间缩短到 20 min 以内。 液相色谱柱有许多专业公司生产，表为某型号高效液相色谱分析柱。;549;四、检测系统 检测系统的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外可见吸收、荧光、示差折光、化学发光检测器等。 紫外可见吸收检测器 ( ultraviolet-visibledetector，UVD) 是 HPLC 中应用最广泛的检测器，几乎所有的液相色谱仪都配有这