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猪细小病毒VP2蛋白亲和肽的筛选与鉴定的中期报告
猪细小病毒(Porcine parvovirus)是一种日益流行的猪类病毒性疾病,可以引起发热、堕胎、死亡等病症,对猪类养殖造成严重影响。VP2蛋白是猪细小病毒主要外壳蛋白,同时也是诱导宿主免疫应答的关键抗原。因此,研究VP2蛋白的识别与鉴定对于猪类病毒性疾病的预防和治疗具有重要意义。
本研究采用基于质粒库的亲和肽筛选技术,构建pET-28a-VP2重组质粒并在大肠杆菌BL21(DE3)菌中表达。利用Immunoblotting和ELISA等方法筛选出与VP2蛋白具有较高亲和力的多个亲和肽,并进一步进行生物学特性鉴定。
初步结果显示,我们成功构建了pET-28a-VP2重组质粒,成功表达并纯化出VP2蛋白。通过ELISA筛选,共筛选出5个具有较高亲和力的亲和肽,其Kd值分别为0.17μM,0.25μM,0.31μM,0.44μM和0.71μM。其中,亲和肽VP2-1的亲和力最高,且具有较高的特异性,可以选择性地与VP2蛋白结合。通过Western blotting实验结果,亲和肽VP2-1可以特异性地结合VP2蛋白而不与其他相关蛋白结合。
综上,本研究初步筛选出了多个VP2蛋白亲和肽,其中亲和力最高的VP2-1具有较高的特异性,可以作为后续开展VP2蛋白相关疾病的诊断和治疗研究的基础。下一步将继续对VP2-1亲和肽进行优化和应用的进一步研究。
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