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东海海参多糖的分离纯化、结构解析及其抗凝血活性研究的中期报告
为了进一步深入研究东海海参多糖的抗凝血活性,本研究对海参进行了分离纯化并进行了结构解析。具体过程如下:
1. 海参多糖的提取
选取新鲜海参,去除内脏和残渣后切成小块,用清水反复洗涤3~4次,用凉开水浸泡12小时,然后加入适量的水,煮沸2小时,过滤,收集滤液,再次加水煮沸1小时,过滤,两次滤液合并,浓缩至体积的1/10。
2. 多糖的分离纯化
将得到的海参多糖溶液经过硫酸铵醇沉淀,离心去上清,得到沉淀物,用0.05mol/L Tris-HCl溶液(pH8.0)溶解,经过分子筛层析柱分离,收集多糖组分,浓缩至适当浓度。
3. 多糖组分的分子量分析
采用凝胶渗透色谱法(GPC)测定多糖组分的分子量,结果显示多糖组分的分子量在1000-10000Da之间。
4. 多糖的结构解析
采用直线偏振兴波测定法、紫外光谱分析法和核磁共振波谱技术,对多糖进行了结构解析。结果显示多糖由α-L-岩藻糖、β-D-葡萄糖、α-D-半乳糖以及α-D-葡萄糖组成,具有多糖链状结构。
5. 抗凝血活性研究
采用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)测定法,对多糖的抗凝血活性进行了研究。结果表明,多糖对PT和APTT均有显著的抑制作用,其抗凝血活性与多糖的结构和分子量有关。
综上所述,本研究对东海海参多糖的分离纯化、结构解析以及抗凝血活性进行了初步研究,为进一步研究海参多糖的功能及其应用提供了重要的基础数据。
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