小鼠精子畸形试验.pptx

EXPERI3ME经口急性毒性N实T验上一张 下一张实验目的实 验内容实验材料实 验步骤实验结果 结果分析院 系：生化环院 任课老师：吴雨龙任课班级：09食品、行09食品食品专业食品毒理学实验南京晓庄学院开 始结 束 EXPERI3ME经口急性毒性N实T验上一张 下一张实验目的 实验内容实验材料 实验步骤实验结果 结果分析精子畸形试验是检测受试化学毒物能否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方法。通过实验，学习和掌握小鼠精子畸形试验 的原理和步骤。实验四 小鼠精子畸形试验1.实验目的南京晓庄学院开 始结 束 EXPERI3ME经口急性毒性N实T验上一张 下一张实验目的实 验内容实验材料实 验步骤实验结果结 果分析2.实验原理南京晓庄学院开 始结 束精子畸形是指精子的形状异常和异常 精子数量的增多。生殖系统对化学毒物的 作用十分敏感，在其他系统还未出现毒性反应前，生殖系统可能已出现了损害作用。 正常情况下，哺乳动物的精液中也存在少 量的畸形精子，但在某些化学毒物的作用 下，特别是在可引起生殖细胞遗传性损伤 的化学毒物作用下，哺乳动物睾丸产生的畸形精子数量可大量增加。因此，可以用 EXPERI3ME经口急性毒性N实T验上一张 下一张实验目的实 验内容实验材料实 验步骤实验结果结 果分析2.实验原理南京晓庄学院开 始结 束检查雄性动物接触化学毒物后精子畸形率 的高低，来反映该化学毒物的生殖毒性和 对生殖细胞潜在的致突变性。化学毒物引起精子畸形的机制尚未完 全清楚。正常情况下，精子的成熟和正常 形态发生过程受多种基因调控，一旦这些 基因中的一个或多个在化学毒物的作用下 发生突变，就会导致畸形精子数量的大量增加。一般认为，常染色体上的基因控制 EXPERI3ME经口急性毒性N实T验上一张 下一张实验目的 实验内容实验材料实 验步骤实验结果结 果分析2.实验原理南京晓庄学院开 始结 束精子畸形，Y-性连锁基因控制畸形精子的 表现。某些特异的染色体重排，如性、常 染色体易位，是化学毒物诱发哺乳动物畸 形率增高的主要机制。由于精子畸形有可能影响生殖。因此， 当受检物引起精子畸形率增高，即使不一 定是化合物诱发生殖细胞突变的结果，但 也表明受试物直接或间接损害精子，从而可能影响生殖。 EXPERI3ME经口急性毒性N实T验上一张 下一张实验目的 实验内容实验材料实 验步骤实验结果结 果分析3.实验材料南京晓庄学院开 始结 束实验动物：体重18-22g小鼠。实验器材：灌胃针、注射器5套、眼科剪、眼 科镊、显微镜、饲养笼等。实验试剂：磷酸盐缓冲液、生理盐水、无水乙 醇、2%伊红水溶液、甲基磺酸甲酯 或甲基磺酸乙酸或环磷酰胺。 EXPERI3ME经口急性毒性N实T验上一张 下一张实验目的 实验内容实验材料 实验步骤实验结果结 果分析4.实验步骤南京晓庄学院开 始结 束动物选择成熟的大鼠、小鼠均可使用。由于 小鼠较为经济，且有大量实验证实小鼠在该试 验系统中对化学毒物最为敏感，故一般采用雄 性小鼠，年龄宜在6～8周。剂量与分组试验至少应设3个以上剂量组，并 同时设立阳性对照组和阴性对照组。接触化学 毒物后每组至少应存活5只动物。最高剂量组5d 总剂量应能使部分动物死亡。一般可采用LD50的2～4倍剂量，或预先给予化 学毒物的LD50，以求得最高总剂量，然后以它的 1/2（或1/5、1/10）作为下一剂量组的接触剂 量，依此类推。 EXPERI3ME经口急性毒性N实T验上一张 下一张实验目的实 验内容实验材料 实验步骤实验结果 结果分析4.实验步骤南京晓庄学院开 始结 束阳性对照可用环磷酰胺20mg/kg或甲基磺酸甲酯 75mg/kg或甲基磺酸乙酯60mg/kg，进行腹腔注 射，每天一次，连续5d。阴性对照选用给予相 同体积的溶剂。3.染毒与采样可采用一次或每天一次连续5d的 方法进行染毒。染毒途径多用腹腔注射，也可 采用与人体实际接触化学毒物相同的途径，如 经口、吸入和皮肤接触等。一般认为精原细胞后期或初级精母细胞早期对 化学诱变剂较为敏感，在接触化学毒物后4～5 周精子畸形率最高，故选择在第一次染毒后第 35d进行采样。也可在染毒后第1、第4和第10周 EXPERI3ME经口急性毒性N实T验上一张 下一张实验目的 实验内容实验材料实 验步骤实验结果结 果分析4.实验步骤南京晓庄学院开 始结 束分三次采样，或者在染毒后每周采样一次，连续 进行动态观察，直至精子形态恢复正常。4.制片用颈椎脱臼法处死小鼠，剪开腹腔，分 离并摘取双侧附睾，将附睾放入盛有约3ml磷酸 盐缓冲液或生理盐水的小平皿中，以眼科剪将 附睾尾剪成小块，用吸管将悬浮液轻轻吹打5～ 6次，静置3～5min，用四层擦镜纸滤除组织碎 片，吸取此精子悬液滴于清洁载玻片上，均匀 推片，待玻片晾干后