均相免疫分析技术-Binding-Assay.pptxVIP

均相免疫分析技术-Binding Assay ;目录;TR-FRET;FRET：荧光共振能量转移;FRET：荧光共振能量转移;FRET;TR：时间分辨;TR: 时间分辨;;TR-FRET优势;TR-FRET举例分享;试剂选择;TR-FRET举例分享;TR-FRET举例分享;TR-FRET缺陷;利用供体微珠（ Donor beads）和受体微珠（Acceptor beads ）来检测生物分子的相互作用，微珠表面覆盖了一层水凝胶，作为生物连接的功能基团。供体微珠含有光敏剂-酞菁，在680nm的光照射后将它周围环境中的氧分子转化为高能活跃的氧状态-单体氧。单体氧在其4μs的半衰期内可在溶液中扩散高达200nm的距离。如果在该范围内存在受体微珠，单体氧再与邻近的受体微珠上的二甲基噻吩化合物产生化学冷光反应，产生冷光效应(波长大约370nm)，继而通过激发一系列的化学反应，最终让受体微珠在520-620nm产生荧光信号。如果两种微珠的距离超过200nm ，单体氧无法扩散到受体微珠，则不会有信号的产生。 在680nm波长的激发下，每个供体微珠能够释放60,000单体氧每秒，产生非常高的信号放大。 由于单体氧非常不稳定，此反应相当快速仅4μs，加上供体微珠和受体微珠距离超过200nm，反应随之下降，所以只有抗原抗体分子结合才能触发反应，通过测定荧光量来反映抗体的活性。;Alpha;Alpha