复制型HBV小鼠模型建立及可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠制备的中期报告.docxVIP

复制型HBV小鼠模型建立及可诱导肝细胞特异性表达uPA转基因小鼠制备的中期报告 本项目旨在建立一种复制型乙型肝炎病毒(HBV)小鼠模型，并通过转基因技术使肝细胞特异性表达人类尿激酶原激活酶(uPA)，从而制备高效的小鼠肝癌模型。 在本期中期报告中，我们完成了以下工作： 1. 建立了HBV小鼠模型。我们通过在小鼠体内注射HBV基因组DNA和Ad-HBV1.3腺病毒，成功复制了HBV感染小鼠的模型。利用定量PCR技术检测小鼠血液中的HBV DNA水平，发现HBV DNA水平从第4天开始增加，最高峰出现在第10天，之后逐渐下降。 2. 筛选了适合制备转基因小鼠的uPA启动子。我们先在体外细胞实验中筛选出4种uPA启动子，并利用荧光素酶检测其活性。结果表明，其中一种uPA启动子的活性最高，能够明显促进荧光素酶的表达，因此我们选择了该启动子用于后续的转基因小鼠制备实验。 3. 利用CRISPR/Cas9技术制备了uPA转基因小鼠。我们设计了包含uPA启动子和EGFP多个序列的转基因载体，并利用CRISPR/Cas9技术将该载体导入小鼠胚胎干细胞中，最终制备出了uPA转基因小鼠。我们通过PCR、荧光定量等多种方法验证了转基因小鼠的纯度和特异性表达。 在下一阶段的工作中，我们将继续深入探究HBV小鼠模型的特点及其与肝癌发展的关系，并进一步验证uPA转基因小鼠在肝癌研究中的应用价值。