物质含氮量的测定——微量凯氏定氮法.docxVIP

生物物质含氮量的测定 微量凯氏定氮法 一、 目的 1、 了解微量凯氏定氮法测定蛋白质含量的基本原理。 2、 掌握本试验的操作步骤。 二、 原理 生物材料中含有许多含氮的有机物，如蛋白质、核酸、氨基酸等，故含氮量 的测定在生化研究中十分重要。知道了含氮量，就可推知蛋白质量。本法适 于测定0.2?2.0毫克的氮。 有机物与浓硫酸共热，有机物转变为氨，氨与硫酸作用生成硫酸铵，后者与强 碱作用释放出氨,借蒸汽将氨蒸至硫酸液中和的浓度，即可计算出样品的含 氮量。 本实验用直接法来判断中和程度。用硼酸作为氨的吸收溶液，结果使溶液中 氢离子降低，混合指示剂(pH4.3?pH5.4)由黑紫色变成绿色。再用标准酸来 滴定，使硼酸恢复到原来的氢离子的浓度为止，指示剂出现淡紫色终点，此时 所耗的盐酸量为氨的量。 NH +H BO - NHHBO NHHBO+HCl —— NHCl+H BO 3 3 4 4 2 4 4 2 4 4 3 4 为了加速消化，可加入CuSO4作催化剂，硫酸钾或硫酸钠可提高溶液的沸点。 此外硒汞混合物或钼酸钠可作为催化剂，且缩短作用时间，H2O2也可加速反 应。 三、 试剂和器材 1、 试剂的配制 (1 )样液7.5g蛋清溶于0.9% NaCl液,并以生理盐水稀释至100ml。如有不 溶物，离心取上清备用，即为7.50%的鸡蛋清溶液。 30%氢氧化钠溶液 2%硼酸溶液 混合指示剂