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重组大肠杆菌生产TaqDNA聚合酶发酵工艺优化 肖云基金项目：武汉职业技术学院校级项目（2022YK035）作者简介：肖云（1980- 基金项目：武汉职业技术学院校级项目（2022YK035） 作者简介：肖云（1980-），女，副教授，硕士，研究方向为现代食品生物技术。E-mail （1.武汉职业技术学院生物工程学院，湖北 武汉 430072；2.华中农业大学国家微生物重点实验室，湖北 武汉 430070） 摘要：Taq DNA聚合酶是PCR技术中广泛应用的耐热酶。本研究以酶产量和酶的比活力为考察指标，通过单因素试验和响应面分析法优化重组大肠杆菌生产TaqDNA聚合酶发酵工艺，对酶的比活力显著性顺序为：IPTG诱导剂浓度发酵温度pH，最佳发酵工艺参数为：发酵温度37.2℃，pH为7.5，IPTG诱导剂浓度为0.800mmol/L，在此条件下发酵，TaqDNA聚合酶比活力达到43.8215U/mg。 关键词：TaqDNA聚合酶；酶比活力；发酵工艺 中图分类号：Q815 文献标识码:A Optimization of fermentation process for TaqDNA polymerase production by recombinant Escherichia coli XIAO Yun1,CHEN Jie1, JU Shou-yong1，2 (1. College of Bioengineering, Wuhan Polytechnic, Wuhan,Hubei 430072；2.National Key Laboratory of Microbiology, Huazhong Agricultural University, Wuhan, Hubei 430070) Abstract: Taq DNA polymerase is a thermostable enzyme and widely used in PCR technology. In this study, the enzyme yield and specific activity of the enzyme were taken as the inspection indicators. The fermentation process of TaqDNA polymerase produced by recombinant Escherichia coli was optimized by single factor test and response surface analysis. The order of significance of specific activity of the enzyme were: IPTG inducer concentrationfermentation temperaturepH, and the optimal fermentation process parameters were: fermentation temperature 37.2 ℃, pH 7.5, IPTG inducer concentration 0.800mmol/L, under this condition, The specific activity of TaqDNA polymerase reached 43.8215U/mg. Key words: TaqDNA polymerase; Specific activity of enzyme; fermentation process 聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学领域最重要的研究工具之一。在PCR技术中，DNA聚合酶起着关键性作用[1]。PCR反应扩增DNA是在高温条件下进行的，因此需要一种热稳定的酶。Taq DNA聚合酶最初是从嗜热杆菌(Thrmus aquaticus)中分离纯化得到的热稳定性DNA聚合酶，是PCR反应中最常用的一种DNA聚合酶[2]。而目前大多数实验室主要依赖公司商品化的Taq DNA聚合酶[3,4]。利用重组大肠杆菌生产Taq DNA聚合酶不但可以解决原始菌株产量低，而且可以通过简化纯化步骤，缩短工艺生产流程，为大规模生产Taq DNA聚合酶打下基础。 由于Taq DNA聚合酶在PCR中的广泛应用，有关该酶的制备技术一直在不断地优化提高[5]。为了不断提高该酶的表达量、酶活力和特异性，很多研究主要是针对酶基因本身，表达载体的构建，分离纯化方法。但是对于重组耐热Taq DNA聚合酶在大肠杆菌中发酵生产的最佳表达条件的研究鲜有报道[6]。本文在前期研究的基础上，考察重组大肠杆菌生产Taq DNA聚合酶发酵