植物逆境生理水孔蛋白.pptxVIP

水孔蛋白（aquaporin, AQP）; 水通道即存在于哺乳动物、植物和微生物细胞膜中转运水的特异孔道，该孔道是由一系列具有同源性的内在膜蛋白家族成员（membrane intrinsic proteins，MIP）所组成，称为水通道蛋白或水孔蛋白(aquaporin, AQP)。 植物水孔蛋白在植物体内形成水选择性运输通道，在植物种子萌发、细胞伸长、气孔运动、受精等过 程中调节水分的快速跨膜运输。 有些水孔蛋白还在植物逆境应答中起着重要作用，因此研究水孔蛋白引起了广泛关注。;（一）植物水孔蛋白的发现; 约翰霍普金斯大学医学院的 Agre等 (1988) 在分离纯化红细胞膜上的Rh多肽时，发现了一个28 kD的疏水性跨膜蛋白，称为 形成通道的整合膜蛋白28(channel-forming integral membrane pro CHIP28)，1991年完成了其cDNA克隆。但当时并不知道该蛋白的功能。 Karl Windhage博士，将体外转录合成的CHIP28 cDNA注入非洲爪蟾的卵母细胞中，发现在低渗溶液中，卵母细胞迅速膨胀，并于5 min内破裂。 为进一步确定其功能，又将从红细胞中提取的高纯度的CHIP28蛋白整合到脂质体上，进行高渗处理，通过内部荧光物质的荧光变化来反映其体积的变化，与对照相比， CHIP28极大地增加了脂质体的透水性并 受到了氯化汞的可逆抑制，表现为很低的活化能，证实其为水选择性，并称CHIP28为Aquaporinl(AQPl)。;表达AQPl非洲爪蟾的卵母细胞，表明AQPl在细胞膜上有水通道的功能。; 约翰霍普金斯大学医学院的Peter Agre教授因发现水通道蛋白获得2003年诺贝尔化学奖 他与通过X射线晶体学技术确认钾离子通道结构的洛克斐勒大学霍华休斯医学研究中心的罗德里克·麦金农共同荣获了2003年诺贝尔化学奖。 離子通道中「濾嘴」邊上的四個氧原子的位置，恰好跟鉀離子在水溶液中的情況一樣，亦即濾嘴邊上的氧與水分子的氧 距離相同，所以鉀離子能夠安然通過通道；鈉離子尺寸較小，無法順利接上濾嘴邊上的四個氧原子，因此只能留在水溶液，而無法輕易穿過通道。; AQPl的发现后，短短几年内，在细菌、酵母、动物、植物中分离出许多水孔蛋白同源基因。 在植物中第一个水孔蛋白r-TIP是由Maure等(1993)从拟南芥中分离出来的。r-TIP的cDNA在爪蟾卵母细胞中???异源表达证明它具有水分运输特性，属于植物水孔蛋白中的液泡膜内在蛋白(tonoplast-membrane intrinsic protein，TIP)。;（二）植物水孔蛋白的种类;根据通透小分子种类、可将AQPs分为两类：; 植物水孔蛋白主要分布在质膜和液泡膜上。 PIP与TIP之间的氨基酸同源性较低 (约50%左右)，而且PIP较TIP具有较长的N端。 水孔蛋白在植物中的含量也是相当高的。例如，萝卜的TIP占总液泡膜蛋白的40%；萝卜的PIP也占总质膜蛋白的10%；拟南芥PIP2则占总质膜蛋白的15% ；拟南芥的5种PIP1至少占总质膜蛋白的1 % 水孔蛋白在植物中有如此广泛的分布和高的含量，暗示着水孔蛋白在植物生命活动中具有极其重要的作用。;AQP的结构;AQP1是由四个相同的亚基构成，每个亚基的相对分子质量为 28kDa，含269个氨基酸残基。每个AQP亚基为一个功能性孔道;AQP1的每个亚单位共跨膜6次，并在胞内外形成5个环(A、 B、C、D、E)。A、C、E环位于胞外，B、D环及氨基和羟基 末端位于胞内。在跨膜结构域2与3、5与6之间各有一个环状结构，是水通过的通道。;Pro：脯氨酸 Ala：丙氨酸 Asn：天冬酰胺 NPA：天-脯-丙;AQPl单体含有6个倾斜的跨膜a螺旋，组成了一个右手螺旋束。; AQPl很短的N端位于胞质侧。螺旋1穿过胞膜，通过胞外的loopA与螺旋2相连。螺旋2又顺邻近螺旋1的地方穿回膜内，并目靠近 AQPl四聚体的轴心。 在螺旋2的胞质侧，loopB又折回膜内，将NPA结构放在膜的中间位置，紧接NPA结构形成螺旋HB，螺旋HB靠近螺旋6。在胞质侧，距离四聚体轴心最远的地方，HB从膜内出来和螺旋3相连接。 螺旋3在邻近螺旋1的地方穿出胞膜。LoopC位于胞外，连接着螺旋3和4。 螺旋4穿过胞膜，通过很短的靠近四聚体的loopD与螺旋5连接。 螺旋5穿过螺旋2和4的中间出膜。紧接螺旋5的loopE又从胞外折回到膜内，将NPA结构置十单体分子的中心，与loopB的NPA结构形 成一个合适的角度，并且也在孔内形成了螺旋HE 。 螺旋6靠近螺旋4从膜外穿膜到膜内，其C端位于胞质侧。; 螺旋1和3 (36. 70)，螺旋4和6 (40. 90)，螺旋2和5(28. 50组a螺旋交叉成一