条件性基因敲除的原理和设计原则.docxVIP

条件性基因敲除的原理和设计原则 Fl ox 小鼠一般要通过设计构建打靶载体、胚胎干细胞重组、雯胚显微注射、， 和嵌合体小鼠传代来获得 这种小鼠跟Cr e 工具小鼠交配， 旧于Cr e 的表达，介导两个 LoxIP 位点序列的重组，从而敲除两个LoxP 之间的序列已由 于不同Cr e 工具小鼠的 C工e 表达有组织I细胞特异性， 就可以达到在不同组织，、细胞里特异性敲际目的基臣的目标。比如上 皮细胞、胸腺细胞、T 细胞、B 细胞、心肌细胞、肠道、肺脏等9 那如何设计条件性基因敲陈小鼠呢？这里所说的设计主要是 Fl ox 小鼠的设计。所惘条件性敲院， 是说除了特定细胞外，其它细胞里面没有任何的基因表达异常。一般情况下，， 不要在第一个外显 前厮放皿l axP 序列。因为第一个外显子前而一般是启动于。放盟LoxP 序列有可能会破坏或改 变启动千活性i 条件性敲除一般是敞掉最早引 起移码突变的外显子。这样的话，最好不要敲侔有起始密码子.A.TG的 外显子口 否则的话，， 基因可能会利用0即 豹的 ATG 编码一个缺少部分N 端序列的蛋白， 这个蛋白很可能有全部或部分野生蛋白的功能。在选抒要敲除的外显子的时候（各放一个 Lox P 在一个外显子的两侧），该外显子的碱基数日不能是3N，否则新基因pr e- RNA 拼接得到的咄NA 不能产生移码突变凸 会产生一个与野生蛋白相比