印第安纳型织物性口炎病毒一步法r-pcr检测方法的建立.docxVIP

印第安纳型织物性口炎病毒一步法r-pcr检测方法的建立 这是艾滋病毒科的嗜水性病毒（vsv）的成员。这是一个非分布的负链流行病毒病毒，可导致各种哺乳动物的流行性口炎（vs），主要表现为舌头、嘴唇、口腔粘膜、乳头、蹄状冠层等表皮红斑。VSV主要感染马、牛、猪等成年家畜。人也可感染此病,引起流感样症状,严重者可引起脑炎。VS被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病。VSV主要有2个血清型,代表株为印第安纳(Indiana,IN)株和新泽西(New Jersey,NJ)株。 VS在世界范围内广泛流行,我国虽无此病,但在国际畜禽贸易频繁的今天,有必要建立一种快速有效的检测方法作为技术储备,以防止该病传入我国。目前,国内在VSV的RT-PCR检测方面也做了一些研究。本试验用VSV感染小鼠,对病毒在实验动物小鼠上的感染性、致病性以及从小鼠组织中提取总RNA的RT-PCR方法进行了研究,旨在建立一种快速准确的诊断方法,应用于IN型VSV的检测。 1 材料和方法 1.1 中毒和细胞 VSV、FMDV、SVDV种毒,BHK21细胞均由笔者所在研究室保存。 1.2 实验动物 ICR小鼠(3周龄内)购自扬州大学实验动物中心,饲养于负压动物房的负压隔离器内。 1.3 pcr试剂及药物 Trizol购自Invitrogen公司;PCR所用试剂、AMV反转录酶、RNA酶蛋白质抑制剂、TaqDNA聚合酶、d