第四章病毒抗原与抗体检测技术演示文稿.pptVIP

二、酶联免疫吸附试验Enzyme-linkedimmunosorbentassayELISA酶标记抗体（抗原）与待测抗原（抗体）发生特异性反应，加入酶底物，通过酶对底物的显色反应，对待测抗原（抗体）进行定位、定性或定量分析。本文档共74页；当前第31页；编辑于星期六\13点12分本文档共74页；当前第32页；编辑于星期六\13点12分间接法检测抗体+++固相抗原标本酶标抗体底物显色本文档共74页；当前第33页；编辑于星期六\13点12分双抗体夹心法检测抗原+++固相抗体标本酶标抗体底物显色本文档共74页；当前第34页；编辑于星期六\13点12分竞争法可检测抗原、抗体YYY+YYY+YYY参考管酶标抗原YYY+YYY+YYY待测管酶标抗原抗原本文档共74页；当前第35页；编辑于星期六\13点12分捕获法检测IgM抗体+++抗IgM标本抗原酶标抗体显色（含IgM）+本文档共74页；当前第36页；编辑于星期六\13点12分三、免疫酶染色试验ImmunoenzymaticstainingtestIEST酶标抗体（抗原）—抗原（抗体）复合物底物有色底物本文档共74页；当前第37页；编辑于星期六\13点12分三、免疫酶染色试验细胞免疫酶染色均相酶免疫测定——无需分离游离与结合的酶标记物酶标记物结合后改变酶活性非均相酶免疫测定—需分离游离与结合的酶标记物液相：用二抗或沉淀去除游离酶标记物固相：ELISA本文档共74页；当前第38页；编辑于星期六\13点12分第三节放射免疫技术RadioimmunoassayRIA利用放射性核素灵敏精确性与抗原抗体反应特异性相结合进行定量分析放射免疫核素标记抗原与未标记抗原竞争性结合特异性抗体免疫放射核素标记抗体结合待测抗原R.S.Yalow本文档共74页；当前第39页；编辑于星期六\13点12分第三节放射免疫技术125I、131I、3H、14C标记纯化鉴定放射性免疫活性本文档共74页；当前第40页；编辑于星期六\13点12分第三节放射免疫技术本文档共74页；当前第41页；编辑于星期六\13点12分第三节放射免疫技术放射免疫竞争法本文档共74页；当前第42页；编辑于星期六\13点12分++++++++BoundFreeAgAb6/8=0.754/8=0.52/8=0.251/8=0.125B/B+F本文档共74页；当前第43页；编辑于星期六\13点12分第三节放射免疫技术放射免疫以未结合的Ag*为F，Ag*Ab复合物为B，则B/F或B/(B＋F)与Ag的量变存在着函数关系－剂量反应曲线本文档共74页；当前第44页；编辑于星期六\13点12分第四节血清学试验中和试验血凝/血凝抑制试验补体结合试验本文档共74页；当前第45页；编辑于星期六\13点12分一、中和试验neutralizationtest体外将病毒与特异性抗体混合并发生反应，再将混合物接种至敏感的宿主体内，然后测定残存病毒感染力的方法。中和抗体本文档共74页；当前第46页；编辑于星期六\13点12分一、中和试验（一）原理中和抗体存在使病毒不能吸附和穿入宿主细胞，使病毒失去感染力。当病毒与抗体混合后，接种敏感宿主细胞再观察敏感宿主的情况，即观察残存的病毒对宿主的感染力。本文档共74页；当前第47页；编辑于星期六\13点12分一、中和试验（二）方法步骤病毒---已知滴度，并有感染力测滴度：细胞培养，将病毒10倍稀释接种敏感细胞或动物，观察CPE或动物感染情况，确定滴定终点以CCID50或LD50表示标准病毒试验浓度：100CCID50/单位体积或100LD50/单位体积本文档共74页；当前第48页；编辑于星期六\13点12分一、中和试验抗体用细胞培养法测病毒抗体的滴度：将倍比稀释的病毒抗血清液与等量的标准病