诺如病毒分子检测培训.pptx

诺如病毒分子检测培训

汇报人：刘老师

2023-11-29

CATALOGUE

目录

诺如病毒概述

分子检测基本原理

实验室设置及设备准备

试剂选择与配制方法

操作流程与注意事项

质量控制与数据分析方法

生物安全与个人防护措施

总结回顾与展望未来进展

01

诺如病毒概述

诺如病毒是一种RNA病毒，属于杯状病毒科。

该病毒具有高度的传染性和变异性，易引起暴发流行。

诺如病毒是全球急性胃肠炎散发病例和暴发疫情的主要致病原之一。

主要通过粪口途径传播，包括摄入粪便或呕吐物产生的气溶胶，或间接接触被排泄物污染的环境而传播。

人传人

食用被诺如病毒污染的食物或饮用被污染的水也可感染病毒。

食物和水传播

感染诺如病毒后，潜伏期通常为24-48小时，最短12小时，最长72小时。

潜伏期

包括恶心、呕吐、腹痛和腹泻，部分患者有发热、头痛和寒战等全身症状。儿童患者以呕吐为主，成人患者腹泻较多。病程通常较短，一般为2-3天。

主要症状

02

分子检测基本原理

原理

PCR利用DNA聚合酶，以单链DNA为模板，通过引物与模板DNA的互补配对，实现DNA片段的指数级扩增。

定义

PCR（PolymeraseChainReaction，聚合酶链式反应）是一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA片段。

步骤

PCR反应包括三个基本步骤，即退火、延伸和变性，通过循环这三个步骤，实现DNA片段的快速扩增。

定义

实时荧光PCR（Real-timeFluorescentPCR）是一种在PCR反应过程中实时监测扩增产物荧光信号的分子生物学技术。

原理

实时荧光PCR在PCR反应体系中加入荧光标记的探针或荧光染料，当探针与扩增产物结合或荧光染料嵌入双链DNA时，会发出荧光信号。通过实时监测荧光信号的变化，可以判断PCR反应的进程和产物量。

应用

实时荧光PCR具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，广泛应用于病毒、细菌等病原体的检测以及基因定量分析等领域。

优势

分子检测具有灵敏度高、特异性强、检测周期短等优点，能够快速、准确地检测出病毒等病原体的存在。此外，分子检测还可以对病毒进行分型、定量和溯源分析，为疫情防控和疾病诊断提供有力支持。

局限性

分子检测对实验条件和操作人员的技术水平要求较高，容易出现假阳性或假阴性结果。此外，分子检测通常需要使用昂贵的仪器和试剂，成本较高，限制了其在基层医疗机构的广泛应用。因此，在实际应用中需要结合实际情况选择合适的检测方法。

03

实验室设置及设备准备

实验室分区

通风系统

消毒设施

废弃物处理

01

02

03

04

明确清洁区、半污染区和污染区，并设立缓冲区，确保各区域相对独立且标识清晰。

安装高效过滤器和适当排风装置，确保实验室内空气单向流动，防止病毒扩散。

配备紫外线灯、高压蒸汽灭菌器等消毒设备，定期对实验室进行全面消毒。

设置专门的感染性废弃物收集容器，采用高压蒸汽灭菌或化学消毒等方法进行处理。

实验操作前需开启生物安全柜紫外灯照射30分钟，实验过程中保持柜门关闭，操作完毕后及时清理工作台面并关闭紫外灯。

生物安全柜使用

严格按照仪器操作说明进行操作，避免交叉污染，定期对仪器进行校准和维护。

PCR仪使用

根据试剂盒要求设定反应条件和参数，确保反应体系准确性，实验结束后及时清理仪器。

实时荧光定量PCR仪使用

注意电泳液的使用和更换，避免交叉污染；凝胶成像系统使用时需关闭紫外灯预热，避免对结果产生影响。

电泳仪及凝胶成像系统使用

04

试剂选择与配制方法

选择针对诺如病毒特异的试剂，以确保准确检测目标病毒。

特异性

敏感性

稳定性

选择具有高灵敏度的试剂，能够检测到低浓度的病毒样本。

选择稳定性好的试剂，以确保长时间保存和使用过程中的准确性。

03

02

01

按照说明书要求准备所需试剂、耗材和设备。

准备工作

根据试剂说明书，将各组分按照一定比例混合，制备成反应液。

配制反应液

将反应液分装至适当容器中，并标记好名称、浓度和配制日期等信息。

分装与标记

将试剂储存在规定的温度范围内，以确保其稳定性和有效性。

温度

避免试剂直接暴露在阳光或强光下，以防光降解影响性能。

光照

保持储存环境的湿度适中，以防试剂吸湿或干燥失效。

湿度

05

操作流程与注意事项

样本采集

使用无菌棉签或专门采样拭子，采集患者粪便或呕吐物样本。

针对诺如病毒基因序列，设计特异性引物和探针。

引物与探针设计

按照试剂盒说明书，配置PCR反应体系，包括酶、缓冲液、引物、探针等。

反应体系配置

将处理好的样本加入PCR反应体系中，进行扩增反应。

加样与扩增

1

2

3

观察扩增曲线，判断样本中是否含有诺如病毒RNA。

扩增曲线分析

根据Ct值大小，判断样本中诺如病毒RNA含量高低，Ct值越小，病毒含量越高。

Ct值解读

结合扩增曲线和Ct值