原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
碱性磷酸酶Km值的测定
■2.掌握碱性磷酸酶（AKP）活性测定的原理和方法
但当底物浓度增大到一定极限时，则反应速度趋于恒定，此最大反应速度Vmax，反应速度与底物浓度之间的关系可用米氏方
程来表示，即：
其中Km为米氏常数，
Vmax为最大反应速度，
当V=Vmax/2时，则Km=[s]。
Km是酶的特征常数，测定Km是研究酶的一种方法
:
:
磷酸苯二钠+H2OAKPOH-苯酚
苯酚+4-氨基安替比林K3Fe(CN)6醌衍生物
（红色
)
【
管号123
混匀后37℃水浴，预温5分钟左右
678
0.400.600.800
碳酸缓
液(pH=10)
蒸馏水
底物液0.050.15(0.04M)
0.900.90
0.400.20
0.900.90
0.950.85
0.900.90
0.750.70
0.90
0.60
4
0.25
5
0.30
0
1
混匀，室温放置10分钟左右,以8号管为空白，于5l0nm比色，记录各管的光密度
碱性溶液1.01.01.01.01.01.01.0
4-氨基安替比林
铁氰化钾
1.0
2.0
1.0
2.0
1.0
2.0
1.0
2.0
1.0
2.0
1.0
2.0
1.0
2.0
2345678
81216
实验结果】
1、原始数据
结果记录
OD
底物浓度mmol/L
0.3330.2000.1670.1250.0830.063
1
1
1/[S]
1/OD
【
6
0
3
5
1
2、作图
■以[s]为横轴，OD510为纵横作图，观察曲线形状；查Km值
■以1／［s]为横轴，1／OD510为纵轴作图
观察曲线形状；查Km值
■比较两个值的差异.
1/[s
-1/Km
底物浓度与反应速度关系曲线
双倒数曲线
1/2VMAX
VMAX
[S]
Km
■比较两种Km测定方法各自的优缺点
文档评论（0）