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附件2 标本采集、分离培养和鉴定
1.标本采集
标本采集应在2小时内用无菌方法采集新鲜标本，置于灭菌容器中或直接接种于增菌培养基中，登记好标本编号和来源送检，如不能及时送检，标本要存放在专用的标本运送箱内，包扎好以免容器破损。
1.1血液
应根据病程的不同阶段采集不同标本进行检测，宜在发病早期和抗生素使用前采集。抽取病人3～5ml血液，立即接种已在室温（20℃）平衡的血培养瓶中。推荐采血量为10ml。所有情况下，接种的标本量必须做好记录。血培养瓶在室温条件下运送至实验室。
1.2血清
余下的2ml病人血液（作为上述采集血液程序的一部分）及病后2-3周采集恢复期血液2ml，分离血清做血清学检测（肥达氏试验等）。
1.3粪便
用无菌采便器采集新排出的粪便约1g直接放入增菌培养管（8-10ml沙门菌增菌液）内，尽快送检。
1.4水样标本按《伤寒、副伤寒防治手册》中所述的方法进行水源标本的采集和分离培养。
5食品标本固体食品需剪碎和研磨，奶和奶制品可直接取样增菌，具体操作见《伤寒、副伤寒防治手册》，所用的培养基及鉴定方法参考《中华人民共和国国家标准（食品卫生检验方法微生物学部分）》。
注意事项采集标本及标本接收时应认真核对名单及标本号，并作好收样记录（附表2）。
分离培养
2.1血培养 血培养瓶放在37℃培养箱里培养10天，每天观察生长情况，如出现混浊现象，应马上转种麦康凯/血平板，即使没有肉眼可见的生长，也必须在1、2、7天转种麦康凯/血平板。
2.2粪便培养增菌管37℃培养18～24小时，挑取培养物转种到SS平板，37℃培养18～24小时，如果没有观察到有可疑菌落生长，再继续培养24小时，观察结果，挑取可疑菌落。
2.3水样标本按《伤寒、副伤寒防治手册》中所述的方法进行水源标本的采
集和分离培养。
2.4食品标本固体食品需剪碎和研磨，奶和奶制品可直接取样增菌，具体操作见《伤寒、副伤寒防治手册》，所用的培养基及鉴定方法参考《中华人民共和国国家标准（食品卫生检验方法微生物学部分）》。
5菌落形态见表1。
表1 沙门菌属菌落形态
沙门菌属 大肠杆菌
麦康凯平板 不发酵乳糖（无色）的光滑型菌落 发酵乳糖（粉色）的光滑型菌落
22SS平板 不发酵乳糖、产HS（中心黑色的无 发酵乳糖（粉色）菌落色菌落）或不产HS
2
2
生化鉴定
从每个标本的血培养瓶转种的麦康凯平板挑取3个可疑菌落，粪便培养转种的麦康凯/SS平板挑取3-5个可疑菌落分别转种到以下培养基：
3.1 KIA：穿刺2/3中段，在斜面上划线。
37℃培养18～24h，观察生化试验结果，挑取KIA生化管上菌苔做革兰氏染色，并做好记录。
2符合沙门菌KIA反应的，取该管斜面菌苔转种MIU：穿刺接种培养基，并沿穿刺线拔出接种针。西檬氏枸橼酸盐琼脂：在斜面上划线。
*生化结果及血清凝集试验符合菌株转种一个营养琼脂平板（药敏实验用）。伤寒副伤寒沙门菌生化特性如表2，表3。
表2 伤寒、副伤寒沙门菌生化特性
伤寒菌
－
+
±
红
黄
(无气泡)
－
+
－
底层不变色细
菌扩散生长
甲型副伤
寒菌
－
○+
－
红
黄
(有气泡)
－
+
－
同 上
乙型副伤
寒菌
－
○+
+
红
黄
(有气泡)
－
+
－
同 上
丙型副伤
寒菌
－
○+
+
红
黄
(有气泡)
－
+
－
同 上
菌乳糖葡萄糖H2SKIA斜面色
菌
乳
糖
葡萄
糖
H2S
KIA
斜面
色
颜
中段
颜色
尿 动
素 力
MIU
靛基质
颜色变化
底层不变色加
大肠杆菌
○+
○+
u
黄
黄
(有气泡)
— ±
+
试剂后表层呈
吲哚红
志贺菌
－
+
－
红
黄
— －
±
底层不变色
血清学鉴定
取符合伤寒、副伤寒菌生化反应的KIA斜面上菌苔用沙门菌属诊断血清做玻片凝集试验，并设盐水对照，见表4。
方法：挑取KIA斜面上菌苔，先用O多价血清凝集，如发生凝集，再选用单价O因子血清凝集（不需煮沸），并用盐水做对照。如果O多价血清不凝集，则用Vi血清鉴定Vi抗原。将细菌制成悬液，经100℃水浴30分钟，破坏其Vi抗原，然后再与O多价和单价血清凝集（先做盐水、O多价、Vi，再做O2、O4、O6.7、O9因子血清。）。
O抗原确定后，再用H因子血清凝集。
不同沙门菌血清型，对O、H及Vi因子血清反应情况如下：
表3 伤寒、副伤寒沙门菌主要生化特性
动
葡
乳
麦
甘
蔗
硫
靛
尿
甲
V
枸
卫
木
阿
赖
鸟
力
萄
糖
芽
露
糖
化
基
素
基
│
橼
茅
胶
拉
氨
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