表达外源rhBMP2的CHO细胞株稳定性分析及rhBMP2的制备的开题报告.docxVIP

表达外源rhBMP2的CHO细胞株稳定性分析及rhBMP2的制备的开题报告

一、研究背景和意义

骨形态发生蛋白2（BoneMorphogeneticProtein2，BMP-2）是一种重要的细胞生长因子，在骨组织的分化、再生和修复中起到了重要的作用。许多临床领域，如骨科、口腔颌面外科、整形外科、神经外科等需要使用BMP-2刺激骨生长，但由于其制备复杂且价格昂贵，限制了其广泛应用。

为了解决这个问题，许多研究者将人工合成的重组BMP-2(rhBMP-2)注入到植入物中，但这种方法存在许多问题。因此，为了满足临床的需求，采用外源转录表达获得rhBMP-2的生产已成为一个可行的选择。CHO细胞（ChineseHamsterOvarycells）是最常用的生物制药细胞株之一，其表达系统确保了产生较高质量的蛋白质。因此，本研究旨在构建rhBMP-2表达的CHO细胞株，并探讨其稳定性及rhBMP-2的制备方法，为临床应用提供一种可行的途径。

二、研究方法

1.构建外源rhBMP-2的CHO细胞株。

选用pCDNA3.1-rhBMP-2质粒，经过线性化处理，电转化到CHO细胞中，选择表达rhBMP-2的单克隆细胞系，并进行稳定性检测。

2.检测rhBMP-2的表达稳定性。

通过RT-qPCR和Westernblot分析不同生长期的CHO细胞中rhBMP-2mRNA和蛋白质表达水平