豆芽中蛋白质含量的测定.docxVIP

——考马斯亮蓝G-250染色法

生科2012级3班童雪晨2012506068

一、 前言

蛋白质在细胞和生物体的生命活动过程中，起着十分重要的作用。生物的结构和性状都与蛋白质有关。蛋白质还参与基因表达的调节，以及细胞中氧化还原、电子传递、神经传递乃至学习和记忆等多种生命活动过程。在细胞和生物体内各种生物化学反应中起催化作用的酶主要也是蛋白质。许多重要的激素，如胰岛素和胸腺激素等也都是蛋白质。因此，测定蛋白质含量具有重要意义。

二、 材料与方法

1、 材料

绿豆芽、黄豆芽

2、 方法

1） 采用考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量，按下表（一）所示取7支试管，依次加入各溶液，反应后立即摇匀，置室温下放置5分钟，然后测各管的OD值，以OD值为纵坐标，浓度值为横坐标绘制标准曲线。

2） 称取绿豆芽、黄豆芽下胚轴各1g，放入研钵中，加少量石英砂和2ml水，研成匀浆，转入离心管，再用水分三次冲洗研钵（每次

4ml）,均转入同一离心管。等重后3500r/min,离心15min,取上清液转入25ml容量瓶，用水定容（样品提取液）。

3）取0.5ml样品提取液于试管中，加入考马斯亮蓝G-250染色液5ml，充分混匀，放置5分钟，测OD值，记录结果，查曲线，得蛋白质浓度（ug/ml）。

三、结果分析

表（一）制作标准曲线加样表

编号

1

2

3

4

5

6

黄豆芽

绿豆芽

标准蛋白（ml）

0.0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.5

0.5

水(ml)

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0

浓度(mg/ml)

O.0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

X

X

染色液（ml）

5

5

5

5

5

5

5

5

OD值

0.000

0.066

0.297

0.562

0.825

0.967

0.265

0.187

表（二）标准曲线

经计算得’黄豆芽中蛋白质浓度X黄=69.5（口顼）

绿豆芽中蛋白质浓度X绿=49.0（Ug/ml）

则，根据公式

样品蛋白质含量（ug/g）=[Xx提取液的总体积]/样品鲜重（g）得

黄豆芽中蛋白质含量=1737.5ug/g

绿豆芽中蛋白质含量=1225ug/g

四、 结果讨论

由实验结果可以看出，黄豆芽下胚轴的蛋白质含量明显比绿豆芽下胚轴蛋白质含量高。这一结论对实际生产生活具有很重要的指导意义，应结合实际要求具体选择。

五、 讨论误差

本实验存在一定的误差，对实验结果造成一定的影响。

下面总结导致实验误差的几个因素。

1、 黄豆芽、绿豆芽称量不准确；

2、 样品研磨不充分；

3、 定容时视线未与刻度线平行；

4、 豆芽放置时间过长，导致豆芽细胞呼吸消耗了部分蛋白质；

所选豆芽营养状况较差，包括本身蛋白质含量较低；

5、 考马斯亮蓝的型号使用错误；

五、讨论与思考

测定蛋白质含量的实验材料过程中不同植物组织部位的取材对实验结果是否有影响？

答：有影响，不同植物组织部位的含氮量不同，因此，不同植物组织部位的取材对实验结果有影响；不同植物的蛋白质在生长过程中会转化成游离氨基酸，转换的量不同所以会有影响；不同品种的植物蛋白质含量也不同；不同植物在空气中被氧化的速度不同。