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本科生《p》目的基因制备与克隆策略课件

目录《p》目的基因制备克隆策略基因表达调控基因组编辑应用与展望教学案例分析

《p》目的基因制备01

01提取总DNA从生物样本中提取高质量的总DNA，为构建基因组文库提供必要的物质基础。02片段化将DNA打断成一定大小的片段，一般采用物理或化学方法进行打断。03构建文库将片段化的DNA与载体连接，转化到大肠杆菌中，构建成一个基因组文库。基因组文库构建

010203从生物样本中提取mRNA，作为构建表达文库的模板。提取mRNA将mRNA逆转录成cDNA，生成与原始基因组序列互补的cDNA序列。反转录将cDNA与载体连接，转化到大肠杆菌中，构建成一个表达文库。构建文库表达文库构建

01根据目的基因的序列信息，筛选出含有目的基因的阳性克隆。阳性克隆筛选02对阳性克隆进行测序，验证目的基因是否正确连接到了载体上。测序验证03对阳性克隆进行表达验证，检测目的基因是否可以正确表达。表达验证筛选与鉴定

克隆策略02

质粒载体01质粒是一种小型、自我复制的DNA分子，可用于克隆和表达目的基因。选择合适的质粒载体需要考虑其克隆容量、复制子类型、选择标记等因素。噬菌体载体02噬菌体是一种病毒，可以感染细菌并将其基因组插入到细菌染色体中。噬菌体载体具有高克隆容量、高表达水平等优点，但需要考虑安全性问题。人工染色体03人工染色体是一种由人工构建的染色体，可以克隆和表达大片段DNA。其优点是具有较高的稳定性和遗传可操作性，但需要考虑构建难度和成本等因素。克隆载体选择

直接克隆法将目的基因直接插入到克隆载体中，经过转化和筛选即可获得阳性克隆。该方法简单快速，但需要目的基因具有可直接识别的特征。一步法将目的基因与克隆载体连接后，直接转化到受体细胞中，筛选阳性克隆即可。该方法一步到位，但需要使用高效的转化方法。两步法将目的基因与克隆载体连接后，先转化到一种容易筛选的宿主细胞中，筛选阳性克隆后再将其转移到另一种宿主细胞中进行扩增。该方法较为繁琐，但可以提高阳性克隆的筛选效率。克隆方法选择

01转化方法02阳性克隆鉴定选择合适的转化方法将克隆载体导入受体细胞中，常用的转化方法有电穿孔法、热激法、化学转化法等。通过筛选和鉴定阳性克隆，确定目的基因是否成功克隆到载体中。常用的鉴定方法有PCR鉴定、酶切鉴定、测序鉴定等。转化与鉴定

基因表达调控03

转录起始转录起始是基因表达的第一步，需要依赖RNA聚合酶的催化。转录起始的调控主要是通过顺式作用元件（如启动子、增强子等）和反式作用因子（如转录因子、阻遏因子等）来实现。转录延长转录延长是RNA链的合成过程，需要依赖RNA聚合酶的催化。转录延长的调控主要是通过影响RNA聚合酶的合成和活性来实现。转录终止转录终止是RNA链的合成结束过程，需要依赖RNA聚合酶和转录因子的共同作用。转录终止的调控主要是通过影响RNA聚合酶和转录因子的合成和活性来实现。转录水平调控

5端帽子修饰3端尾巴修饰RNA剪接修饰转录后水平调控真核生物mRNA的5端帽子修饰可以影响mRNA的稳定性和翻译效率。5端帽子修饰的调控主要是通过帽子结合蛋白来实现。真核生物mRNA的3端尾巴修饰可以影响mRNA的稳定性和翻译效率。3端尾巴修饰的调控主要是通过多聚腺苷酸尾结合蛋白来实现。真核生物mRNA需要进行剪接修饰以去除内含子并连接外显子。RNA剪接修饰的调控主要是通过剪接体复合物来实现。

起始水平调控翻译起始是蛋白质合成的第一步，需要依赖mRNA和核糖体的结合。翻译起始的调控主要是通过影响核糖体的合成和活性来实现。延长水平调控翻译延长是氨基酸链的延长过程，需要依赖核糖体和tRNA的结合。翻译延长的调控主要是通过影响核糖体和tRNA的合成和活性来实现。终止水平调控翻译终止是蛋白质合成的结束过程，需要依赖释放因子（RF）的作用。翻译终止的调控主要是通过影响释放因子的合成和活性来实现。010203翻译水平调控

基因组编辑04

总结词ZFNs（锌指核酸酶）技术是一种在基因组编辑中应用广泛的蛋白质工具。详细描述ZFNs技术利用锌指蛋白与DNA的结合特异性，设计构建能够识别并剪切特定DNA序列的核酸酶。这种技术已广泛应用于基因敲除、基因敲入等基因组编辑实验中。ZFNs技术

总结词TALENs（转录激活样效应因子核酸酶）技术是一种在基因组编辑中具有高效率和特异性的蛋白质工具。详细描述TALENs技术利用转录激活样效应因子的DNA结合特异性，设计构建能够识别并剪切特定DNA序列的核酸酶。与ZFNs技术相比，TALENs技术具有更高的特异性和更少的不良反应。TALENs技术

CRISPR-Cas9（ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats-CRISPRassocia