GB 4789.3-2016食品安全国家标准　食品微生物学检验　大肠菌群计数.pdf

中华人民共和国国家标准

GB4789.3—2016

食品安全国家标准

食品微生物学检验大肠菌群计数

2016-12-23发布

2017-06-23实施

国家食

国家食品药品监督管理总局

Ⅰ

GB4789.3—2016

前言

本标准代替GB4789.3—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》、GB/T4789.32—2002《食品卫生微生物学检验大肠菌群的快速检测》和SN/T0169—2010《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》大肠菌群计数部分。

本标准与GB4789.3—2010相比,主要变化如下:

—增加了检验原理;

—修改了适用范围;

—修改了典型菌落的形态描述;

—修改了第二法平板菌落数的选择;

—修改了第二法证实试验;

—修改了第二法平板计数的报告。

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GB4789.3—2016

食品安全国家标准

食品微生物学检验大肠菌群计数

1范围

本标准规定了食品中大肠菌群(Coliforms)计数的方法。

本标准第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数;第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。

2术语和定义

2.1

大肠菌群Coliforms

在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。2.2

最可能数Mostprobablenumber;MPN

基于泊松分布的一种间接计数方法。

3检验原理

3.1MPN法

MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度,应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。

3.2平板计数法

大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸,在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色,带有或不带有沉淀环的菌落。

4设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:

4.1恒温培养箱:36℃±1℃。

4.2冰箱:2℃~5℃。

4.3恒温水浴箱:46℃±1℃。

4.4天平:感量0.1g。

4.5均质器。

4.6振荡器。

4.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。

4.8无菌锥形瓶:容量500mL。

4.9无菌培养皿:直径90mm。

2

GB4789.3—2016

4.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。

4.11菌落计数器。

5培养基和试剂

5.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨(laurylsulfatetryptose,LST)肉汤:见A.1。

5.2煌绿乳糖胆盐(brilliantgreenlactosebile,BGLB)肉汤:见A.2。

5.3结晶紫中性红胆盐琼脂(violetredbileagar,VRBA):见A.3。

5.4无菌磷酸盐缓冲液:见A.4。

5.5无菌生理盐水:见A.5。

5.61mol/LNaOH溶液:见A.6。

5.71mol/LHCl溶液:见A.7。

第一法大肠菌群MPN计数法

6检验程序

大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。

图1大肠菌群MPN计数法检验程序

3

GB4789.3—2016

7操作步骤

7.1样品的稀释

7.1.1固体和半固体样品:称取25g样品,放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。

7.1.2液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。

7.1.3样品匀液的pH应在6.5~7.5之间,必要时分别用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调节。

7.