羽毛角蛋白质降解菌的分离、鉴定与角蛋白酶基因的克隆、表达的开题报告.docxVIP

羽毛角蛋白质降解菌的分离、鉴定与角蛋白酶基因的克隆、表达的开题报告

一、研究背景

羽毛角蛋白质是鸟类体内重要的结构蛋白质，其主要组成成分为角蛋白，其分子量大、结构紧密，极难降解。但是，一些微生物能够分泌具有角蛋白酶活性的蛋白酶，能够将其降解成小分子氨基酸。因此，分离并鉴定羽毛角蛋白质降解菌，克隆角蛋白酶基因，并进行表达，对生物降解等领域具有重要研究价值。

二、研究目的

1、分离羽毛角蛋白质降解菌并鉴定其菌种；

2、克隆羽毛角蛋白质降解菌中的角蛋白酶基因；

3、表达角蛋白酶基因，获得活性蛋白酶；

4、探究该蛋白酶降解羽毛角蛋白质的机理。

三、研究内容

1、分离羽毛角蛋白质降解菌并鉴定其菌种：

采集不同鸟类的羽毛，通过高温高压法灭菌后，施加不同的培养基，筛选出羽毛角蛋白质降解菌并进行基本生理生化特性研究。最终采用16SrRNA序列分析法鉴定其菌种。

2、克隆羽毛角蛋白质降解菌中的角蛋白酶基因：

从分离出的羽毛角蛋白质降解菌中提取基因组DNA，利用PCR技术扩增出角蛋白酶编码基因。对PCR产物进行酶切、连接、转化等步骤，并对过程中出现的问题进行优化处理。

3、表达角蛋白酶基因，获得活性蛋白酶：

将所得到的角蛋白酶基因进行克隆测序，构建原核表达表达载体并转化大肠杆菌中进行表达。通过SDS、Westernblot等方法确定重组酶的表达情况。最终从包含重组酶的菌体中提取角蛋白酶进行活性测定