DPPH自由基清除实验教学.docxVIP

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一、原理:

DPPH实验步骤

浓度12样品3 4561VC2 3456sampleblankcontrol测517nm处的吸光度,取平均値,计算每个浓度的DPPH清除率,做出折线图。

浓度

1

2

样品

3 4

5

6

1

VC

2 3

4

5

6

sample

blank

control

测517nm处的吸光度,取平均値,计算每个浓

度的DPPH清除率,做出折线图。

清除率=(1-(A

sample blank

-A )/A

control

)X100%

DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基,其醇溶液呈紫色,且需低温避光储藏,具有单一电子,故能接受一个电子或氢离子,在波长为517nm下具有最大吸收。有自由基清除剂存在时,DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最大光吸收波长处的吸光值下降,且下降程度呈线性关系,吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加,从而以评价试验样品的抗氧化能力。此抗氧化能力用抑制率来表示,抑制率越大,抗氧化性越强。

二、实验步骤:

配制0.1mM的DPPH溶液:配两次,每次取0.002gDPPH溶于50mL乙醇,避光保存。

配制0.5mg/mL的Vc溶液,至少2mL(设为阳性对照,选择性做)

配制一定浓度的样品溶液,至少2mL母液(也可以配制不同溶度梯度样品,计算IC50)

上板(避光操作,上完板后,室温避光30分钟,测吸光度)

96孔板,三组,每组设3个复孔,每孔加入量及96孔板分布如下:sample(样品组):样品溶液100uL+DPPH醇溶液100uL(每个浓度3个孔)blank(空白组):样品溶液100uL+无水乙醇100uL(每个浓度3个孔)control(对照组):DPPH醇溶液100uL+水100uL(一块板可共用一个对照组,3个孔)

检测并计算清除率

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