高中生物竞赛课件第七章转基因植物.pptxVIP

第一节植物的转基因技术一、植物转基因技术的基本路线1.分离目的基因2.将目的基因与载体连接，形成重组DNA3.利用细菌繁殖扩增重组DNA4.将与表达载体相连的重组DNA导入到目标植物的细胞中5.筛选转化细胞，并诱导产生转基因植株6.大规模种植二、转基因的受体系统1.植物组织受体系统受伤的组织，愈伤组织等2.植物细胞原生质体系统3.生殖细胞受体系统单倍体培养作为受体；直接在生殖细胞受精时进行基因转化4.叶绿体转化系统优点：①便于外源基因定位整合，②基因多拷贝，表达量高，③导入的外源基因性状稳定、安全性好，④能直接表达原核基因三、外源基因导入植物的方法1.DNA直接转移法1）化学刺激法PEG、PNA（肽核酸）、磷酸钙、氯化钙等化学试剂等处理原生质体，可使其捕获外源DNA2）电击法在适当的外加电压下，细胞膜可能被击穿，使得外源DNA容易进入细胞内。原生质体不受伤害，而且膜孔可恢复3）显微注射法借助显微注射仪，将外源DNA通过机械方法直接注射到受体细胞4）基因枪法也称微粒轰击法将DNA包被到金粒或钨粒上然后把这些粒子加速推进靶细胞。优点是转化受体迅速简单、取材广泛，不受基因型限制，金属微粒的喷射面广，植株可育性高，转化频率高等5）脂质体介导法是将DNA或RNA包裹于脂质体内，然后进行脂质体与细胞膜的融合，通过融合导入细胞。转化效率较高，简单易操作，重复性好6）微激光束法利用激光微束脉冲引起细胞膜可逆穿孔，从而将外源DNA导入受体细胞7）花粉通道法将外源DNA片段在自花授粉后的特定时期注入柱头或花柱，外源DNA沿花粉管通道或传递组织通过珠心进入胚囊，转化不具备细胞壁的受精卵，合子或早期胚体细胞。由于转化的是完整植株的卵细胞、受精卵或早期胚胎细胞，导入的DNA分子整合效率较高2.载体介导法1）Ti质粒介导的整合转化程序Ti质粒的结构与功能豆科类植物的根部常常会形成根瘤，这是由于植物根部被一种革兰氏阴性土壤杆菌----农杆根瘤菌（A.tumefaciens）感染所致，其致瘤特性是由该菌细胞内的野生型质粒Ti(Tumor)Ti质粒的结构图谱整个质粒200-250kb其中T-DNA12-24kbtms的编码产物负责：合成吲哚乙酸tmr的编码产物负责：合成植物分裂素tmt的编码产物负责：合成氨基酸衍生物冠瘿碱2）植物病毒介导的转染例如：以双链DNA病毒花椰菜花斑病毒（CaMV）基因组作为载体，去除有关的致病性基因，换上外源基因，体外包装成有感染力的病毒颗粒，转染植物细胞原生质体，并由此再生成整株植物第二节转基因植物的筛选与检测一、报告基因检测报告基因(reportergene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，即是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体1.抗生素抗性基因npt、aphIV、spt、cat、ble注：npt,新霉素磷酸转移酶基因，对卡那霉素、G418，巴龙霉素及新霉素等具有抗性；aphIV,潮霉素磷酸转移酶基因，对潮霉素具有抗性；spt,链霉素磷酸转移酶基因，对链霉素具有抗性；cat,氯霉素乙酰转移酶基因，使氯霉素丧失抗菌素活性。aacc3和aacc4,庆大霉素3-N-乙酰转移酶基因，对庆大霉素有抗性；ble，博来霉素抗性基因，对博来霉素有抗性2.抗除草剂抗性基因Bar，编码磷化麦黄酮乙酰转移酶（PAT），使PPT（磷化麦黄铜）的自由氨基乙酰化而对PPT解毒。抗除草剂草丁膦和双丙氨磷；epsps，草甘膦抗性标记基因，抗草甘膦；als，绿黄隆抗性标记基因3.显色或发光报告基因GUS酶活性检测GUS是β-葡萄糖苷酶，能催化裂解一系列的葡萄糖苷，产生一系列具有发色基团或发荧光的物质，可用分光光度计、荧光计或组织化学法对GUS活性进行定量和空间定位分析，检测方法简单灵敏荧光素酶活性检测荧光素酶催化的底物为6-羟基喹啉类似物，在镁离子、ATP及氧的作用下酶使6-羟基喹啉类似物脱羧，生成激活态的氧化荧光素，发射光子后，转变成常态的氧化荧光素3.显色或发光报告基因绿色荧光蛋白检测GFP即绿色荧光蛋白，可在395nm和490nm的波长下发出独特的绿色荧光二、分子生物学检测方法酶联免疫检测（ELISA）：利用抗原与抗体的特异反应，当抗原与抗体结合时，通过结合在抗体上的酶作用于特定的底物后发生显色反应，借助于比色鉴定转基因植物PCR技术检测分子杂交第三节改进转基因的技术