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【小结】常见血细胞分析仪的检测原理与直方图散点图
小编将以国内占有率排在前两位的希森美康(SYSMEX)和迈瑞(MINDRAY)的仪器为例来进行说明,这两个品牌的血细胞分析仪加起来占据了国内市场的一大半。考虑到现在五分群仪器已经十分普及,本文不涉及白细胞直方图的有关内容。
血细胞分析仪检验图形:根据检测原理不同,分为直方图和散射图两种细胞分布图形。
【第一部分】血细胞直方图(Histogram)
希森美康/迈瑞血细胞分析仪常规检测红细胞/血小板的技术为电阻抗原理,又称库尔特原理):
如上图所示,悬浮在电解质溶液中的血细胞相对于电解质溶液是非导电的颗粒,当体积不同的血细胞(或类似颗粒)通过计数小孔时,可引起小孔内外电流或电压的变化,形成与血细胞数量相当、体积大小相应的脉冲电压,从而间接区分出血细胞群,并分别进行计数。
血细胞直方图,其横坐标为血细胞体积大小,纵坐标为不同体积细胞的相对频率,是表示细胞群体分布情况的统计图形。它可以显示出某一特定细胞群的平均细胞容积、细胞分布情况及有无明显异常细胞群的存在。
直方图观察的内容:
①峰的位置,反映主细胞群的位置有无异常。
②峰的高低,大致反映主细胞群数量的多少。
③峰底的宽度,反映细胞群容积大小的不均一性或离散程度大小,如RDW、PDW等。
④有无异常峰出现,和正常直方图相比有异常峰出现,多提示血液中有异常细胞群或干扰因素存在。
⑤峰的起始处或结尾处有无异常,若有多提示有干扰因素。
(一)红细胞直方图
正常红细胞直方图是一条近似正态分布的单峰曲线,通常位于
36~360fl范围内,横坐标表示RBC体积,纵坐标表示不同体积红细胞出现的频率。
正常红细胞集中在50~200fl范围内,可见两个细胞群体:一个是红细胞主群,从50~125fl,为一个两侧基本对称、较狭窄,呈现倒扣钟状的正态分布曲线;另一群是大细胞群,位于主群右侧不与X轴重合拖尾部分,分布在125fl~200fl区域,又称“足趾部”,是一些大红细胞、网织红细胞、红细胞的二聚体、多聚体及白细胞的混合物。
异常红细胞直方图(图2-11):
以小编的工作经验,上图中给出的巨幼细胞性贫血的红细胞直方图,曲线顶点低的太夸张了;
下图为小编在工作中遇到的一例明确诊断为巨幼贫的红细胞直方图:
另外,特别典型的红细胞双峰(明显有两个峰顶,如下图),还可见于缺铁性贫血治疗有效(补铁)、巨幼细胞性贫血治疗有
效(补维生素B12和/或叶酸)、输血后等。
(二)血小板直方图
正常血小板直方图是一个偏态分布的单峰光滑曲线,通常在2~30fl范围内,主要集中在2~15fl。
当血标本中存在大血小板、血小板聚集、小红细胞、红细胞碎片时,可出现异常血小板直方图(如图2-12)。
【第二部分】血细胞散点图
希森美康/迈瑞血细胞分析仪的白细胞分群原理基本一致:
溶血剂使白细胞的细胞膜轻微受损,此时可利用荧光染料对各类白细胞进行染色,再运用“鞘流”“扫流”技术,使混悬在样品中的白细胞单个成束排列通过激光检测器,对白细胞的参数进行分析,获取前向散射光(反映细胞大小)、侧向散射光(反映细胞内部结构)和侧向荧光(反映细胞内核酸/细胞器的种类与多少)三种信号,根据这三种参数区分各类白细胞。
总之,希森美康/迈瑞五分群血细胞分析仪在测定血细胞参数的同
时,还可打出直观白细胞分类彩色的散射图,也称散点图。
【补充说明】以迈瑞的仪器为例:仪器获取白细胞的三种参数
(前向散射光FS,侧向散射光SS,侧向荧光FL)并放到三维图中,每个白细胞都占据一个独有的位置;将检测的所有白细胞放到三维图中,就有了这个散点图。
散点图观察的内容:
①在分析图形时应注意与正常图形比较,结合细胞参数、报警提示综合分析。
②注意观察散射图各个细胞群区域的大小、密度、颜色深浅。特别要注意除正常细胞群以外区域有无细胞群出现。
一、白细胞散点图
(一)4DIFF(四分群)通道散点图
利用半导体激光流式细胞术、核酸荧光染色技术,采用溶血剂完全溶解红细胞和血小板,白细胞膜仅部分溶解。聚亚甲基蓝核酸荧光染料进入白细胞内,使DNA、RNA和细胞器着色。因为荧光强度与细胞内核酸含量成比例,所以未成熟粒细胞、异常细胞荧光染色深,成熟白细胞荧光染色浅,从而得到4DIFF(四分群)白细胞散点图(如下)。
最新的XN系列中,与该通道对应的是WDF通道,散点的分布基本一致,不同之处在于:
希斯美康XN系列的溶血素试剂溶血能力更弱,在单核细胞膜上打的孔小于XE/XT系列,使单核细胞内容物复杂程度增加,同时增加倾斜度,能更好的区分淋巴细胞和单核细胞。
迈瑞BC-6000/6000plus系列也有与之类似的通道。
(二)WBC/BASO通道
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