葡聚糖凝胶层析法分离纯化纤维素酶的研究.doc

葡聚糖凝胶层析法分离纯化纤维素酶的研究

()西北师范大学学报自然科学版第34卷1998年第4期

()70JournalofNorthwestNormalUniversityNaturalScience

Vol1341998No14

3葡聚糖凝胶层析法分离纯化纤维素酶的研究

3333曾家豫冯克宽王渭霞张振霞

()西北师范大学生物系兰州730070

第一作者简介曾家豫,男,34岁.西北师范大学生物系讲师.主要研究方向为生物化学及分子生

物学.

中图法分类号Q936

()摘要用绿色木霉Trichodermaviride高产变异菌株4131产生的纤维素酶粗酶分别过sephadexG225、sephadexG250、sephadexG275、sephadexG2100和sephadexG2150柱层析.结果表明:sephadexG275对纤维素酶的分离效果最佳,并获得了一个CMC酶组份,其比活力提高到原来的419倍,回收率为4116%.

关键词葡聚糖凝胶分离纯化纤维素酶

近年来,纤维素酶已被广泛地应用于食品、饲料、医药和纺织等领域中,取得了一定的经济效益.纤维素酶的分离纯化及其性质研究逐渐引起了人们的关注.笔者在本文中报道利用葡聚糖凝胶分离纤维素酶的研究结果.

1材料和方法

111材料

〔1〕()11111粗酶液将经过3000r/min离心的绿色木霉Trichodermaviride4131发酵液

()上清液,加入20%饱和度NHSO盐析,充分沉淀后,3000r/min离心,取上清液加入424

()6%饱和度NHSO盐析,3000r/min离心,所得沉淀经透析、冷冻、干燥,得粗酶粉.424

用时,加入pH610的011mol/L柠檬酸2柠檬酸钠缓冲液至原发酵液体积,3000r/min离心,即得粗酶液.

11112sephadexG225、sephadexG250、sephadexG275、sephadexG2100、层析用凝胶

sephadexG2150均为华美生物工程公司产品.

11113仪器层析用仪器为瑞典LKB2137型柱层析系统.

112方法

11211分离纯化粗酶液用pH610的011mol/L柠檬酸2柠檬酸钠缓冲液透析24h,然后上

LKB2137型柱层析系统.凝胶柱216cm×120cm,洗脱液为pH610的011mol/L柠檬酸2柠檬酸钠缓冲液,洗脱速度为12mL/h,每管收集量为214mL,核酸/蛋白检测仪检测280nm处光吸收.

11212纤维素酶活性测定见文献2.

〔3〕11213可溶性蛋白测定据Folin2酚法测定.

3甘肃省教委科研资助课题

33西北师范大学生物系九六届毕业生

收稿日期:1998203225修改稿收到日期:1998206205

1998年第4期曾家豫等:葡聚糖凝胶层析法分离纯化纤维素酶的研究

71Theisolateandpurificationofcellulasebychromatographycolumnofdextrangel1998No14

2结果

取粗酶液各2mL,分别上sephadexG225、sephadexG250、sephadexG275、sephadexG2

100、sephadexG2150凝胶柱层析,结果如图1所示.

图1葡聚糖凝胶层析图谱

结果表明,5种葡聚糖凝胶

中,sephadexG275能将纤维素

酶粗酶分离为4个较清晰的蛋白

(())峰图1a.测酶活,4个蛋

白峰中,峰?具有明显的CMC

()酶活图2.其余4种凝胶对

纤维素酶的分离效果均较

sephadexG275差.因此,笔者

选择sephadexG275分离纤维素

酶,分离结果见表1.

图2sephadexG275图谱表1sephadexG275纯化纤维素酶结果

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