SiRNA介导的耳蜗内髓鞘蛋白零基因表达抑制效应的研究的开题报告.docxVIP

SiRNA介导的耳蜗内髓鞘蛋白零基因表达抑制效应的研究的开题报告

一、研究背景和意义

内耳是人体最重要的感觉器官之一，其正常的功能和结构对人体听觉功能的维持起到了关键的作用。内耳在发生疾病的时候常常会导致失聪和其他听力损伤的现象，这些病变疾病的发生就与内耳中的各种细胞和分子机制的失衡有关系。

髓鞘蛋白零是一种重要的鞘蛋白质，它可以被检测到耳蜗内中的一些细胞和区域，其对于内耳的发育及其维持有重要的作用。一些研究表明在耳蜗疾病中，髓鞘蛋白零的水平会发生变化，因而一些研究者认为将髓鞘蛋白零的表达降低可以用来治疗一些耳蜗疾病。

RNA干扰技术(即RNAi技术)是一种天然的机制，用于在细胞中降低特定基因的表达，从而在细胞水平上靶向治疗疾病。这一技术一直被认为是一种潜在的治疗内耳疾病的方式，特别是对于一些治疗目标不明显的病例。然而，对于耳蜗中使用RNAi技术进行髓鞘蛋白零基因的抑制研究，还缺乏严谨的实验数据支持。

二、研究目的和内容

本研究的目的是探究RNAi技术在耳蜗疾病治疗中的可行性以及其治疗效果，特别是针对髓鞘蛋白零这一关键基因的表达抑制效应。

具体研究内容包括：

1、构建髓鞘蛋白零小干扰RNA(siRNA)载体，通过选择性编码髓鞘蛋白零的siRNA，设计出针对髓鞘蛋白零的siRNA序列并进行载体构建。

2、暴露有效血清因子，通过在体外实验中使用有效血清因子以提高RNAi技术的效率。

3、验证髓鞘蛋白零siRNA在耳蜗内的基因沉默效应，通过对实验组和对照组进行比较分析，以验证RNAi技术在耳蜗内髓鞘蛋白零基因抑制中的可行性。

三、研究方法和技术路线

采用体外和体内两种方法进行实验设计和验证:

1、体外实验:构建含有髓鞘蛋白零siRNA载体的细胞，使用有效血清因子以提高siRNA的吞噬率，通过Westernblotting方法验证髓鞘蛋白零的表达差异。

2、体内实验：SiRNAdelivery处理、主要耳蜗细胞的体外Isolation、Real-timePCR人工回液泵注入耳蜗内等实验步骤的组合。

四、预期成果

预计通过本研究的实验工作，可以得到以下成果：

1、建立相对完善的髓鞘蛋白零表达沉默的siRNA治疗体系。

2、验证siRNA在内耳髓鞘蛋白零基因的抑制效果,并得到描述其功效的相关数据。

3、通过RNAi技术验证其在治疗耳蜗疾病中的应用潜力，并为临床治疗提供新的思路。

五、研究创新点

1、RNAi在耳蜗治疗方面的应用潜力值得进一步深入研究探索。

2、本研究采用选择性编码髓鞘蛋白零的siRNA序列，针对性较强，具有一定的临床应用前景性。

3、本研究在提高RNAi技术效率方面，采用了较为新颖的有效血清因子方法，创新性强，并可供未来更广泛临床应用。