一种pcr随机引物和使用其构建靶向测序文库的方法与流程.pdfVIP

一种pcr随机引物和使用其构建靶向

测序文库的方法与流程

PCR（聚合酶链反应）是一种用于复制DNA片段的技术，而随机

引物PCR（RandomPrimerPCR）则是其中的一种变体，通过使用随机

引物，可以扩增DNA样品中的各个区域，而不是特定的序列。以下是

使用随机引物PCR构建靶向测序文库的基本流程：

材料和试剂：

1.DNA样品

2.随机引物

3.dNTP混合物

4.聚酶酶

5.缓冲液

6.MgCl2

7.DNA聚合酶酶

8.文库构建试剂盒（如果需要）

流程：

1.DNA提取：

•从所需的生物样本中提取DNA。

2.准备PCR反应物：

•在冰上准备PCR反应物混合物。

•将DNA加入PCR管。

•加入随机引物，它们是短的随机序列，通常在15-20碱基之间。

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•加入dNTP混合物，聚合酶酶，缓冲液和MgCl2。

3.进行PCR：

•使用PCR仪进行PCR反应。温度和时间的设置根据所用的聚合

酶和引物而异。

•典型PCR温度周期包括初始变性步骤（95°C，3分钟），然后

是30-40个循环，每个循环包括变性（95°C，30秒），退火（随机引

物的优化温度，通常在40-60°C之间，30秒），延伸（72°C，时间

根据扩增的目标片段大小而变化）。

•最后是最终延伸步骤（72°C，5分钟）。

4.检查PCR产物：

•在琼脂糖凝胶上电泳分析PCR产物，以确认扩增的DNA片段。

5.纯化PCR产物：

•使用PCR产物纯化试剂盒等方法，将PCR产物纯化。

6.构建文库：

•将纯化的PCR产物用于构建文库。这通常包括将DNA片段连接

到适当的测序适配器上。

7.文库验证：

•进行文库验证步骤，确保所构建的文库符合预期。

8.测序：

•使用所构建的文库进行高通量测序，例如Illumina、Ion

Torrent等。

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请注意，这只是一个基本的流程概述。在实际操作中，你可能需

要根据特定的试剂和设备进行一些优化和调整。同时，随机引物PCR

在构建文库时可能引入一些偏见，因此在进行研究时要特别注意其局

限性。

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