糖连接位置的测定.pptxVIP

;;;;;（五）糖链连接次序决定

1、经典方法：部分水解法

※过程：多糖→部分水解→低聚糖→

分析低聚糖连接次序→推测糖链连接次序

2、驰豫时间法

※基本原理：外侧糖自旋晶格驰豫时间T1

比内侧大，同一糖上各碳自旋晶格驰豫时间

T1则基本相同。;;;（六）苷键构型及氧环确实定

1、苷键构型测定方法以下：

⑴.分子旋光差法（klyne法）

⑵.酶催化水解方法

比如：麦芽糖酶只能水解α-苷键；

苦杏仁酶只能水解β-苷键等。;;⑷13C-NMR判断糖苷键构型

经过C1-H1偶合常数来判断苷键构型.

比如：D-葡萄吡喃甲苷，

α-苷键：JC1-H1=170Hz

β-苷键：JC1-H1=160Hz;3、糖氧环大小测定

①依据13CNMR数据来判断

比如：

吡喃糖环中13C3-NMR信号在72-78ppm;

呋喃糖环中13C3-NMR信号在80ppm以上。

②分析Smith降解产物也可判断氧环大小。

③利用甲醇解反应来判断

呋喃型糖甲苷与吡喃型糖甲苷色谱行为不一样。;二、糖链结构研究实例

——皂角苷A结构测定

1、皂角苷A为无定形粉末，是九糖三萜皂苷。

2、HR-FAB-MS负离子源测得

分子量为：1831.7649[M-H]-

3、结合13CNMR、DEPT谱确定皂角苷A

分子式为：C82H128O45;;;;8、薄层酸水解后，与标准品对照证实皂角苷A中尚含有另一个单糖——葡萄糖醛酸。

9、将酸水解后所得苷元再经过各种波谱数据对照证实，确认该苷元为皂树皂苷元。

10、ESI-MS谱图数据

①m/z1699(M--H-132)提醒：

木糖(M=150，150-16-2=132)为末端糖；;②?m/z=955峰提醒：脱掉了是一个六碳糖，

在C3或C16位上连接是一个由葡萄糖醛酸、

半乳糖及木糖组成三糖。

11、对全部13CNMR、1HNMR信号进行归属

（很复杂！）

①归属依据：1HNMR、13CNMR及其

1H-1HCOSY,1H-13CCOSY、NOESY等。;②从表2-4可看到：

A、有两个木糖E、F端基质子化学位移值

完全一样，表示这两个氢信号重合在一起。

B、有一个木糖H与鸡纳糖端基质子化学

位移值完全一样，表示这两个氢信号也重合

在一起。;12、经过HMBC（异核多键相关）谱确定糖与糖连接关系

13、依据1JC1-H1、C1-H与C2-H偶合常数以及C1化学位移值确定苷键构型。;;;③在被苷化糖分子结构中，通常??端基碳直接相连α-C化学位移改变较大些，β-C稍受影响，其它碳原子受到影响则较少。

④在确定了苷中糖种类以后，将苷13C谱

数据与对应单糖13C谱数据进行比较，利用

苷化位移规律可确定苷中糖连接位置。;比如：判断双糖苷中两单糖连接位置

◆将双糖苷13C谱数据与对应单糖13C谱数据进行比较；

◆假如内侧糖某个碳原子化学位移向

低场方向移动了（通常是4~7ppm),而与其

相邻两个碳原子之化学位移值又略向高场

方向移动（约1~2ppm),则内侧糖这个碳

原子就是糖连接位置。;三、红外光谱IR;;4、软电离方式得到碎片峰极少，但有可能取得从分子离子峰按次序失去一个个糖基后碎片离子峰。

假如事先测定了多糖组成，则可依据质谱碎片离子峰信息来推断原糖链连接次序。;;;※???时间：30-120min

※??显色剂：p-甲氧基苯胺-硫酸。

※注意：必须使用冷却系统，将温度维持在

0℃,以免烧坏支持体。

※本法惯用

2、超离心法

※原理：因为微粒在离心力场中移动速度

与微粒密度、大小与形状相关，故将多糖;溶液进行密度梯度超离心时，假如是组成均一

多糖，则应展现单峰。

※详细做法：

将多糖样品制成1%-5%氯化钠或tris-盐

溶液，接着进行密度梯度超离心，待转速到达

恒定后（6000转/min），采取间隔照明法

检测其是否为单峰。;3、旋光光度法

在多糖水溶液中加入乙醇使其浓度到达10%

左右，离心得沉淀。上清液再用乙醇使其浓度

到达20%-25%左右，离心得到第二次沉淀。

比较两次沉淀比旋光度，假如比旋光度相同

则为纯品，不然为混合物。

4、其它方法

如凝胶柱色谱、官能团摩尔比恒定法等。;（二）分子量测定

1、测定多糖分子量物理方法：

沉降法、光散射法、黏度法和渗透压法等。

2、凝胶过滤法介绍：

在凝胶柱上不一样分子量多糖与洗脱体积

成一定关系。采取一系列结构相同