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冷冻切片锇酸染色法在脂肪染色中的应用

周永梅;陈敬文;赖续文;张伟;张福田

【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》

【年(卷),期】2016(032)004

【总页数】2页(P467-468)

【关键词】冷冻切片;锇酸染色法;脂肪染色

【作者】周永梅;陈敬文;赖续文;张伟;张福田

【作者单位】广州军区广州总医院病理科,广州510010;深圳市人民医院病理科,深圳518020;广州军区广州总医院病理科,广州510010;广州军区广州总医院病理科,广州510010;广州军区广州总医院病理科,广州510010

【正文语种】中文

【中图分类】R446

在病理诊断和科研工作中，HE切片常出现大小不等的空泡，常需用脂肪染色来鉴别空泡性质；在某些疾病的诊断及鉴别诊断方面，脂肪染色也具有一定的价值。脂肪染色时常用冷冻切片作苏丹类染色，效果很好[1]。但因其在染色过程中不能接触有机溶剂，封片时采用水溶性封固剂，切片染色后不能长久保存。为解决这些问题，作者实验中用冷冻切片进行锇酸染色，取得了较为满意的效果，现总结介绍如下。

材料收集2010～2011年广州军区广州总医院病理科未经固定的新鲜脂肪组织及肾上腺组织各20例。

仪器 Leica1900冷冻切片机(德国Leica公司)。

试剂OCT包埋剂(Sandon公司，英国)，甲醛-钙液(40%甲醛10ml，蒸馏水

90ml，氯化钙1g)，锇酸染色液(1%锇酸10ml，1%铬酸25ml，冰醋酸5ml

，蒸馏水60ml)，Harris苏木精染色液，0.5%伊红溶液。

1.4方法新鲜组织取材，大小1.5cm×1.5cm×0.3cm，用OCT包埋剂包埋后

，于Leica1900冷冻切片机冷冻后切片，冷冻切片10μm厚，粘于载玻片上，切片放入甲醛钙液内，于立式玻璃染色缸内固定5min，稍水洗，于盛有锇酸染色液的棕色立式玻璃染色缸内避光浸染20min，取出后流水冲洗5min，常规HE复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固[2]。

镜下观察切片，脂肪滴呈黑色，各种较小的脂肪滴均能较清晰显示，背景呈HE复染的颜色(图1、2)。

脂质是中性脂肪、类脂以及它们衍生物的总称，主要是中性脂肪。由于脂类易溶于有机溶剂，石蜡切片在固定、脱水及透明过程中，脂质便溶于乙醇、二甲苯等有机溶剂中，被不同程度的破坏和丢失。为显示脂质，在整个染色过程中不能接触含有乙醇和二甲苯的有机溶剂。因此，在病理诊断和科研工作中，脂肪染色常采用冷冻切片作苏丹类染色，该类染色在染色过程中不可经脱水及透明程序，染色后使用水溶性封固剂封片(甘油或甘油明胶)，切片不能长久保存，必须立即进行观察，给病理诊断及病理资料的收集和保存带来一定的局限。

锇酸又称四氧化锇，其经不饱和脂肪酸的还原作用形成锇和脂质复合物，即氢氧化锇，呈黑色，不能被乙醇、二甲苯等有机溶剂所溶解，对很微小的脂肪滴均能清晰显示。工作中在用锇酸来进行脂肪染色时，常用组织块锇酸染色法，效果较好；组织用锇酸固定染色后经脱水、透明及浸蜡程序后包埋成蜡块，蜡块切片后经脱蜡、脱水、透明后用中性树胶封固；该法对脂肪能较好显示，切片不但能长久保存，也能大批量的制片，但整个操作过程一般需2～4天，用时较长，会对病理诊断带来

一定的延误，特别是术中冷冻病理检查因诊断需要需行脂肪染色时，时间紧急，无法采用。作者实验中用冷冻切片作锇酸染色，既克服了苏丹类染色和锇酸组织块染色的缺点，又吸收了它们各自的优点，切片经锇酸染色后，染色清晰，对脂肪的显示较好，一些较小的脂肪滴均能清晰显示，切片用锇酸染色后经脱水、透明并用中性树胶封固，切片可长久保存，弥补了苏丹类染色后切片不能长久保存的缺点，在染色时间方面，冷冻切片锇酸染色整个染色过程只需40min左右，与苏丹染色的时间相差无几，较锇酸组织块染色的时间大为缩短[3]。

需要特别注意的是，因锇酸属于有毒物质，易挥发，在应用时需注意防护，注意保护眼睛、呼吸器官和皮肤。在配制锇酸染色液时，应小心将原装玻璃管洗净，连同玻璃管投入有色玻璃瓶中，加蒸馏水后再打破玻璃管稀释，过滤后存放于棕色瓶中，密封后放入冷暗处备用。在配制试剂及染色过程中均应在通风柜中完成，试剂尽量不能接触皮肤，并避免溅入眼晴以免造成身体伤害。

【相关文献】

胥维勇,杨群,范小莉,等.显示脂肪的染色方法及其应用[J].实用医技杂志,2008,15(4):53-454.

何忠,冯晓东,林俊莲.改良的锇酸脂肪染色法[J].中国法医学杂志,2002,17(5):284.[3]

龚志锦,詹镕洲.病理组织制片和染色技术[M].上海:上海科学技术出版社,1994:132