红霉素发酵液.docVIP

红霉素发酵液组分测定方法

一、仪器

高效液相色谱仪、高速冷冻离心机、真空冷冻干燥机。

二、色谱条件

HypersilBDS色谱柱（4.6mm×25cm，5um）

流动相：0.025mol/L的磷酸二氢钾溶液【5.7g的磷酸二氢钾溶于1000ml的双蒸水中】乙腈体积比=60：40。

流速：1.0ml/min；柱温：50℃；检测波长：215nm；进样量：20μl

三、样品制备

1、氯仿萃取法：取发酵上清液10ml加入等体积正庚烷，摇匀，取下层，加入10ml氯仿萃取，将萃取液分装，自然晾干后加入流动相或甲醇溶解，过滤进样分析。该法损失率大。

2、冷冻干燥法制备：取一定体积的发酵液，以12000rpm离心10min后，吸取上发酵上清液200μl，冷冻干燥后，加入1ml甲醇溶解。该法用量少，减少了有机溶剂的使用量，有利于节省成本和保护环境，更适合于检测分析。

四、标准品的配制

分别配制不同浓度的红霉素A、红霉素B、红霉素C标准品溶液，以峰面积(Y)对进样量浓度(X)绘制标准曲线。

红霉素组分

配制

A

精密称取红霉素标准品A11mg，加入1ml甲醇溶解，制成11mg/ml的标准液，再从此标准液中吸取0.5ml，与0.5ml甲醇混合，制成5.5mg/ml的标准液，同样的方法配制2.75，1.375，0.6875mg/ml的标准液。

B

准确称取红霉素标