肉桂醇脱氢酶（CAD）活性检测试剂盒（紫外分光光度法） .pdfVIP

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肉桂醇脱氢酶（CAD）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

产品货号：BA1962

产品规格：50T/48S

产品简介：

CAD是木质素生物合成途径中的关键酶之一，催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成与之相应的肉桂醇。该

酶多存在于高等植物、酵母、菌类中，研究该酶可以探讨多生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减

少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

CAD催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP+,在340nm下测定NADPH消耗速率，即可反映CAD活性。

CAD

CinnamicAldehyde+NADPH340nm）CinnamicAlcohoRNADP

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增

加样本量进行检测。

产品组成：

试剂名称规格保存条件

提取液液体60mLxl瓶2-8°C

试剂一粉剂XI瓶-20°C

试剂二液体XI瓶2-8°C

试剂三液体50mLxl瓶2-8°C

溶液的配制：

1.提取液：内含不溶物，使用前摇匀。

2.试剂一：临用前加入15mL试剂三溶解。可溶解后分装-20°C保存，避免反复冻融。

3.试剂二：液体置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入15mL乙醇充分混匀，配好后2-8°C保存。

4.工作液的配制：将试剂一、试剂二、试剂三按1:1:2V:V:V）的比例配制工作液，工作液现用现配。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、ImL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、乙醇和蒸馅水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1.组织：按照组织质量（g）:提取液体积mL）为1：5〜10的比例（建议称取约0.1g组织，加入ImL提取液（加

入前摇匀））进行冰浴匀浆，然后8000g,4°C,离心lOmin,取上清置于冰上待测。

2.细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体

积（mL）为500〜1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入ImL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，

功率200W,超声3s,间隔10s,重复30次）；10000g4°C离心lOmin,取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1.紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm,蒸t留水调零。

2.操作表：在ImL石英比色皿中分别加入下列试剂：

试剂名称（UL）空白管测定管

样本-100

蒸馅水100-

工作液900900

在ImL石英比色皿中分别加入上述试剂，充分混匀后于340nm处测定

10s时的吸光值A1,迅速置于25°C水浴5min,拿出迅速擦干测定5minl0s

时的吸光值A2,计算AA测定管二Al测定-A2测定，AA空白管二A1空白

-A2空白，—A=—A测定管-AA空白管（空白管只需做1-2次）。_________

三、CAD酶活计

1.按蛋白浓度计算

酶活定义：每mg组织蛋白每分钟产生Inmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

CAD酶活（U/mgprot）ud）xl09xV反总