荧光定量PCR技术4.pptVIP

SYBRGreenI工作原理未结合的SYBRgreenI

结合解离曲线识别不同的PCR产物95℃15sec;60℃20sec;95℃15sec在60℃～95℃之间的Ramptime设为19:59

SYBRGreenI的特点可以用于不同的模板使用方便，价格相对便宜灵敏度很高与非特异性产物结合解离曲线选择良好的引物和探针并优化反应条件

TaqManProbes荧光素淬灭剂与目标序列互补FAMTETJOEHEXVICTAMRADABCYL

TaqManProbes工作原理探针与目标序列配对时，发生FRET光能量转移Taq游离的探针荧光基团淬灭剂延伸时，Taq酶水解探针，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离而发出荧光，形成荧光信号Taq发出荧光光另一波长的荧光

随着扩增循环数的增加，TaqMan探针释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系TaqMan探针应用基因检测、病毒定量、细胞因子基因定量、癌细胞基因微突变检测等其结果都具有高特异性与高敏感性但只适合于一个特定的目标

TaqManMGB探针荧光素非荧光淬灭基团与目标序列互补MGB(MinorGrooveBinder)将探针的Tm值提高10℃因此，MGB探针可以比普通TaqMan探针设计得更短，既降低了合成成本，也使得探针设计的成功率大为提高