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a-甘露糖昔酶（a-man）活性检测试剂盒（可见分光光度法）

产品货号：BA1942

产品规格：50T/24S

产品简介：

oi-man分布广泛、种类繁多，在真核生物胞质、内质网、高尔基体、溶酶体中都有发现，不同种类、功能的G-man

共同参与N-聚糖的修饰过程。

oi-man和特定底物发生反应，其生成物在405nm处有特征吸收峰，根据吸光度的变化率可计出oi-man活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增

加样本量进行检测。

产品组成：

试剂名称规格保存条件

提取液液体60mLxl瓶2-8°C

试齐U一液体50mLxl瓶2-8°C

试剂二粉剂x2支-20°C

试剂三液体30mLxl瓶2-8°C

试剂四液体30mLxl瓶2-8°C

标准品粉剂xl支2-8°C

溶液的配制：

1.试剂二：临用前每支加入ImL试剂四溶解，溶解后的试剂在-20°C分装保存，可以保存4周。

2.标准品：5mmol/L的对硝基苯酚标准液。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、ImL玻璃比色皿、匀浆器/研钵、冰和蒸

馅水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1.组织：按照组织质量（g:提取液体积（mL为1：5〜10的比例（建议称取约0.1g组织，加入ImL提取液）进

行冰浴匀浆，然后12000g,4°C,离心lOmin,取上清置于冰上待测。

2.细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细胞或细菌数量（1。4个）:提取液体积（mL

为500〜1000：1的比例（建议500万个细胞或细菌加入ImL提取液）进行提取，冰浴超声波破碎细胞或细菌（功

率200W,超声3秒，间隔7秒，总时间3min；然后12000g,4°C,离心lOmin,取上清置于冰上待测。

3.液体：直接检测。若有浑浊可以离心后测定。

二、测定步骤

1.分光光度计预热30min以上，调节波长至405nm,蒸t留水调零。

2.将5mmol/L的对硝基苯酚标准液用蒸馅水稀释为0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.0195、0.01、0.005mmol/L

的标准溶液备用。

3.操作表：（在1.5mL离心管中）：

试剂名称（UL测定管对照管标准管空白管

样本125125--

标准溶液--125-

试剂一550625625625

试剂二75---

蒸馅水--.125

混匀，37°C水浴或恒温培养箱中准确反应lOmin

试剂三250250250250

混匀，测定405nm处吸光值A,分别记为A测定管、A对