血液等体液标本的细菌学检验鲍曼不动杆菌.pptVIP

关于血液等体液标本的细菌学检验鲍曼不动杆菌第1页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三一、实验目的（一）掌握血标本的采集方法、检验程序（二）掌握鲍曼不动杆菌的分离培养与鉴定。（三）熟悉鲍曼不动杆菌的菌落特点、菌体形态及染色性。第2页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三二、实验器材和试剂器材：酒精灯、火柴、取菌环、载玻片、普通光学显微镜、血平板试剂：3%过氧化氢、氧化酶试剂、革兰染色液、生理盐水、生化管药敏纸片：哌拉西林/他唑巴坦PIP/TA、替卡西林+克拉维酸TIC/CA、头孢他啶CAZ、头孢吡肟FEP、头孢噻肟CTX、头孢曲松CRO、阿米卡星AN、妥布霉素TM、美罗培南MPN、环丙沙星CIP第3页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三三、实验内容（一）菌落观察（二）革兰染色法（三）氧化酶试验（四）接种生化管（五）菌种的综合判断第4页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三四、实验步骤1、标本采集菌血症患者病原菌是周期性出现在血液中，尽管临床症状可能很严重，但患者血液中病原菌浓度水平相当低，因此要求临床多次采血液标本进行肉汤增菌培养，但24小时内一般不超过3次。怀疑为菌血症的患者，原则上应在抗菌药物使用前采取，对已开始抗菌药物治疗的患者可在下次给药前采取，标本大多由肘静脉采取，多部位采集血液标本也可增加阳性率。第5页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三标本采集注意事项：采血部位的皮肤消毒采用三步消毒法：即先用70%酒精擦拭皮肤，再用碘酒消毒，然后用70%酒精脱碘。采集的血液标本应分别注入硫酸镁葡萄糖肉汤（需氧培养）和硫乙醇酸钠肉汤（厌氧培养）培养瓶中。硫酸镁葡萄糖肉汤中和多种抗生素，硫乙醇酸钠肉汤含有硫乙醇酸钠、葡萄糖等还原剂吸收其中的氧，为厌氧菌提供较低的氧化还原电位。血液与培养基的比例应为1：5—1：10儿童婴幼儿一般1-5ml成人一般10ml第6页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三3、常见致病菌检验及报告方式（1）将血液细菌培养瓶置35度孵育，每日观察一次，连续观察至第七天。注意观察血液细菌培养瓶的变化。（2）如怀疑血液细菌培养瓶中有细菌生长，用无菌技术取瓶内液体进行涂片，革兰染色检查。如发现细菌，根据细菌的染色性及形态特征发出初步报告（电话通知主管医生）。（3）根据涂片结果选择相应的抗菌药物，直接从血培养瓶抽取适量液体做初步药敏试验，并于18—24小时后报告初步药敏结果。第7页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三（4）如有发现培养液浑浊、溶血、绿色色素、表面菌膜生长、胶冻状凝固或细胞层颗粒状生长，均为细菌生长现象。用无菌技术取瓶内液体接种固体培养基。包括需氧培养、真菌培养及厌氧培养。第8页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三（5）对细菌菌落涂片、革兰染色，观察细菌形态及染色性。革兰阴性杆菌：进行氧化酶试验并接种KIA培养基、O/F试验、生化鉴定、血清学鉴定、药敏试验。革兰阳性球菌：葡萄串样或散在存在，触酶试验阳性，初步判断为葡萄球菌；触酶阴性链状或散在排列初步判断为链球菌属或肠球菌属，作生化鉴定、血清学鉴定、药敏试验。第9页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三血液标本中常见的细菌革兰阳性球菌：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、A群、B群链球菌、草绿色链球菌、肺炎链球菌、肠球菌、厌氧链球菌、革兰阳性杆菌：产单核李斯特菌、炭疽芽胞杆菌、产气荚膜杆菌。革兰阴性球菌：脑膜炎奈瑟菌、卡他布兰汉菌。革兰阴性杆菌：大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、气单胞菌等。第10页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三（6）报告方式在增菌过程中培养瓶中怀疑有细菌生长，经涂片、革兰染色证实，可报告“疑有XX细菌生长”；经分离培养、生化试验及血清学鉴定后，可报告“血液细菌培养X天，有XX细菌生长”，并同时报告体外抗菌药物敏感试验结果；如果增菌培养至七天，培养瓶中仍无细菌生迹象，经盲目传代证实无细菌生长，可报告“血液细菌培养七天，无细菌生长”。第11页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三注意事项1、一般应在抗菌药物使用前采集血液标本，如果患者已用过抗菌药物或情况不明时，应使用硫酸镁肉汤增菌液。2、对疑为波浪热、亚急性细菌性心内膜炎的患者，培养瓶应孵育至第四周，盲目接种后无菌生长，方可报告阴性。第12页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三注意事项3、为了尽快发现病原菌，在7天的孵育期内应至少盲目接种两次，第一