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Ad5/35mCD20载体的构建及鉴定的开题报告

一、选题背景

在研究基因治疗中，基因载体的选择至关重要。目前，病毒载体在基因治疗中的应用比较广泛。但是，病毒载体存在易发生突变、易触发免疫反应、缺乏选择性等问题，需要引起重视。因此，利用质粒载体作为基因治疗的载体成为了研究热点。

本研究选择腺病毒载体Ad5作为基因治疗的载体，对其中的病毒基因进行剔除和替换，构建了一种新的质粒载体Ad5/35mCD20，用于治疗B细胞恶性淋巴瘤的研究。

二、研究目的

本课题旨在通过基因工程技术，在腺病毒载体Ad5中插入Ad35纤维蛋白的嵌合体，将mCD20基因整合入载体内，从而构建Ad5/35mCD20载体。并对构建的载体进行鉴定，检测其在细胞中的表达情况、对B细胞的选择性以及其他相关特性。

三、研究方法

1.插入Ad35纤维蛋白的嵌合体：

从Ad35中提取纤维蛋白基因进行PCR扩增，接着和Ad5基因组进行同源重组以获取Ad5/35嵌合体基因。将Ad35纤维蛋白基因和启动子序列进行连接，构建成嵌合体，并将其与mCD20基因拼接后，放入质粒中。

2.构建质粒载体：

将嵌合体与mCD20基因拼接后，将其放入载体pAd5进行重组，构建成带有mCD20的pAd5/35mCD20。

3.鉴定重组质粒：

通过酶切、Westernblot、ELISA、PCR等方法来检测质粒构建的效果、蛋白表达情况以