Sanger双脱氧链终止法.pptVIP

Sanger双脱氧链终止法;基本原理：;通常DNA的复制需要：DNA聚合酶，纯单链DNA模板，带有3‘-OH末端的单链寡核苷酸引物，4种dNTP（dATP、dGTP、dTTP和dCTP），ddNTP。;;单链DNA可以由双链DNA完全变性而得到。

其方法，简单的来说，

将反应体系加热至95℃即可得到。;dATP为三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸，生物用dNTP来合成DNA。

ddATP为三磷酸腺嘌呤双脱氧核苷酸，核糖2号3号C上羟基的O被脱去，由于它掺入DNA后DNA的合成就终止了，所以ddNTP是用来测序的。

;DNA聚合酶的特点：;可以购买通用引物或实验室合成15bp～26bp长度的引物，通常以2μg/ml的浓度贮存于-20℃

备用。;Sanger双脱氧链终止法的具体操作：;假如有一个DNA,互补序列是GATCCGAT,

我们试着做一下:;制得的四组混合物全部平行地点加在变性聚丙烯酸受凝胶电泳板上进行电泳，每组制品中的各个组分将按其链长的不同得到分离，从而制得相应的放射性自显影图谱。从所得图谱即可直接读得DNA的碱基序列。

;ManyThanks