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rAAV介导的HSVtk自杀基因系统对乳腺癌细胞杀伤机理的初步研究的开题报告

题目：rAAV介导的HSVtk自杀基因系统对乳腺癌细胞杀伤机理的初步研究

研究背景和意义：

乳腺癌是女性常见的一种恶性肿瘤，治疗方法种类繁多，但目前仍存在很多治疗难题。自杀基因治疗作为一种新兴治疗手段，已经在乳腺癌的治疗中得到了广泛的研究。自杀基因治疗通过引入携带自杀基因的载体，使表达自杀基因的肿瘤细胞自我杀灭，能够对肿瘤细胞进行有选择的杀伤，有效地避免了常规治疗对正常细胞的损害。而rAAV介导的HSVtk自杀基因系统具有载荷量高、转化效率高、毒副作用小等优点，是自杀基因治疗中的一种有前途的基因载体。

本研究旨在深入研究rAAV介导的HSVtk自杀基因系统对乳腺癌细胞杀伤的机理，为乳腺癌的治疗提供新的思路和方法。

研究内容：

1.构建rAAV-hTK表达载体：根据HSVtk基因序列进行设计、合成和克隆，构建rAAV-hTK表达载体。通过PCR和Westernblot等方法对表达载体进行鉴定。

2.评价rAAV-hTK对乳腺癌细胞的杀伤效果：通过转染rAAV-hTK表达载体，对乳腺癌细胞进行检测。采用CCK-8试剂检测不同剂量的rAAV-hTK对MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长抑制效果，并用荧光显微镜、流式细胞仪等方法观察乳腺癌细胞的凋亡情况。

3.探究rAAV-hTK对乳腺癌细胞的杀伤机制：通过Westernblot、RealtimePCR等分子生物学技术，检测rAAV-hTK对MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞的TGFB、Bcl-2和Bax等相关蛋白和基因的表达情况。

预期结果：

本研究预期能够构建高质量、高表达的rAAV-hTK表达载体，并且证明rAAV-hTK具有较好的抑制乳腺癌细胞的生长和诱导乳腺癌细胞凋亡的效果，具有潜在的治疗价值。同时，通过深入探究rAAV-hTK对乳腺癌细胞的杀伤机理，为深化乳腺癌细胞的治疗提供指导和方向。