肿瘤科研项目方案设计.docxVIP

XX肿瘤相关功能基因XXX研究课题设计

Part.1预实验

Part.1

预实验

不同肿瘤细胞株

XXX表达检测

Westernblotreal-timePCR

XXXshRNA

lentivirus

XXXnon-silencinglentivirus

XXXrescuelentivirus

Part.2

细胞功能实验

2株高表达XXX基因肿

瘤细胞平行实验

增殖(MTT)

细胞周期与凋亡(流式

PIAnnexinV双染)

克隆形成

侵袭转移

(transwell实验)

Rescue实验

Part.3

作用机理研究

Genechipco-IP

GST-pulldown

real-timePCR检测下游

分子表达变化

Westernblot

验证

Part.4

裸鼠成瘤实验

肿瘤临床标

本检测

Part.5

肿瘤细胞沉默

XXX后成瘤

肿瘤细胞成瘤后定

点注射瘤体

组织芯片或

免疫组化

相关表型分析

分析XXX表达与肿瘤发

生、转移和预后的相关性

相关分子检测

XXX与化疗、放疗敏感性关

系的分析与实验研究

CellTissue

二、合作项目简介

整个文章的研究思路是，在临床病理当中发现在XX肿瘤标本中XXX 基因特异性高表达，在相应的肿瘤细胞系也得到一致的结果，随后选取2株典型的细胞系用XXX 基因的RNAi的lentivir获us得细胞、整体水平研究数据，了解该基因沉默后对肿瘤增殖，凋亡，侵袭转移能力的影响。最后检测XXX 基因的下游作用分子，寻找其可能的作用途径。

预期文章数据框架:

Fig.1肿瘤病理标本中研究的靶基因呈现表达上调（免疫组化或qPCR）Fig.2不同的XX肿瘤细胞株中该基因的表达也显著增高

Fig.3慢病毒（lentivir）us结构图，肿瘤细胞感染图片

Fig.4靶基因RNAi慢病毒感染肿瘤细胞后，mRNA 和蛋白表达显著下调（qPCR和western）Fig.5在两株细胞上沉默靶基因之后平行的MTT 结果及统计

Fig.6在两株细胞上沉默靶基因之后流式分析细胞周期，计算凋亡率Fig.7在两株细胞上沉默靶基因之后克隆形成能力变化，图片和统计结果

Fig.8用肿瘤细胞感染RNAi慢病毒制备成稳定细胞株，然后做裸鼠成瘤实验，裸鼠图片，每天量瘤子大小，做肿瘤生长曲线，4周处死称瘤重，计算抑瘤率。

Fig.9下游基因的qPCR检测结果（如果有阳性结果就放上去）

Fig.10westernb验lo证t

三、实验方案

上述实验结果

1、XXX 在XX细胞表达检测实验

实验内容：选取多株XX细胞株，检测XXX 基因的表达，高表达XXX 基因的两株细胞用于后续RNAi的研究。

qPCR检测不同细胞株中XXX 的mRNA 水平；

对XXX 表达阳性的细胞株进行感染预实验，确定各个细胞株病毒感染的难易程度

将有XXX 表达并且容易感染的肿瘤细胞感染RNAi病毒并进行MTT 实验

实验目的：确定各细胞XXX 的表达以及在MTT 实验中哪株细胞的功能最明显，作为选择相应细胞株进行后续功能实验研究的依据。

实验在多株肿瘤细胞上平行进行（如qPCR检测发现有细胞低表达XXX，则该细胞不进入MTT 实验）

项目\分组

qPCR-XXX（验证）

细胞增殖检测（MTT法）

2、XXX在肿瘤细胞系中的功能研究

NC Con RNAi

实验内容：根据预实验的结果选择1～2株细胞系进行XXX的相应功能的实验研究，获得一套invitro实验数据。同时在XXXRNAi获得功能表型的变化后，重新导入一个突变的XXX表达病毒载体，使得功能变化得到回复，从而验证RNAi反应和基因功能的特异性。实验目的：确定XXX基因在肿瘤细胞中的功能

KnockDownXXX功能验证

XXXsiRNA病毒

组别说明

Control

空白对照

NC

RNAi阴性对照

XXXRNAi

RNAi病毒

qPCR-XXX

Western-XXX

细胞增殖检测（MTT法）

凋亡检测（annexin-v/pi双染法）克隆形成（克隆形成实验）

3、XXX作用机理研究（下游相关基因检测）

实验内容：根据上述的实验结果确定XXX的功能后，对其相关基因进行检测（qPCR或WB法），确定XXX作用的信号传导通路。相关基因可以是以前研究报道的，也可以是经典的途径如与凋亡相关的、增殖相关的或侵袭相关的途径

实验目的：确定XXX的作用机制

4、XXX在动物水平功能研究

实验内容：运用慢病毒感染后的肿瘤细胞直接与对照细胞在裸鼠体内成瘤，4周后比较瘤体大小，计算抑瘤率，也可以采用细胞成瘤后定点注射瘤体的方式进行实验，两种