化学检测技术.ppt

2、沉淀反应可溶性抗原沉淀反应（precipitation）:可溶性抗原与相应的抗体结合后，在一定条件下出现肉眼可见的沉淀。包括：血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液、各种微生物蛋白分子等。反应特点：比例性包括：沉淀试验、界面试验、免疫扩散（单向免疫扩散、双向免疫扩散）、免疫电泳、免疫亲和层析、免疫荧光*第31页，讲稿共43页，2023年5月2日，星期三关于化学检测技术第1页，讲稿共43页，2023年5月2日，星期三一、糖类的化学检测糖类包括多糖、双糖、单糖单糖和某些双糖具有游离羰基——还原糖多糖和蔗糖等无还原性——非还原糖糖类化学检测主要是利用游离羰基的还原性质，与试剂（氧化剂）进行氧化还原反应而进行测定的。非还原糖必须转化为还原糖再进行测定*第2页，讲稿共43页，2023年5月2日，星期三最常用的试剂：斐林（Fehling）试剂基本组成：A：CuSO4溶液B:NaOH和酒石酸钾钠溶液使用时A、B等体积混合(生成酒石酸钾钠铜）酒石酸钾钠铜是氧化剂，可与还原糖的游离羰基发生氧化还原反应，而进行糖的测定。*第3页，讲稿共43页，2023年5月2日，星期三定糖常用方法1、兰—爱农（Lane-Eynon）法次甲基蓝（亚甲基蓝、四甲基蓝）法、（置换法、直接滴定法）反应终点用次甲基蓝指示剂显示（还原糖滴定斐林试剂，由于次甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜全部还原后，过量1D还原糖使次甲基蓝还原，蓝色消失）多糖或其他非还原糖需转化为还原糖后再滴定如淀粉，可用酸解或酶解*第4页，讲稿共43页，2023年5月2日，星期三操作要点（1）斐林试剂的标定（a）标定预备试验A、B各5mL＋10mL水（250mL三角瓶中）摇匀，加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失，耗标准葡萄糖液（0.1％或0.2％）V1mL。（b）标定A、B各5mL＋10mL水（250mL三角瓶中）摇匀，从滴定管中预先加入（V1-1)mL标准葡萄糖液，摇匀后加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失（滴定在1min内完成），记录消耗标准葡萄糖液的总毫升数V0*第5页，讲稿共43页，2023年5月2日，星期三(2)定糖（a）定糖预备试验A、B各5mL＋10mL样品糖液（250mL三角瓶中）摇匀，加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失，耗标准葡萄糖液（0.1％或0.2％）V2mL。（b）定糖A、B各5mL＋10mL样品糖液（250mL三角瓶中）摇匀，补加（V0-V2）mL水，并从滴定管中预先加入（V2-1)mL标准葡萄糖液，摇匀后加热加热至沸腾，＋2D1％次甲基蓝溶液，用标准葡萄糖液滴定至蓝色消失（滴定在1min内完成），记录消耗标准葡萄糖液的总毫升数V。*第6页，讲稿共43页，2023年5月2日，星期三(3)计算还原糖含量（以葡萄糖计）＝（V0-V)×c×(1/10)×n注意：（a）AB分开储存，防止Cu++变化，临用混合（b）单标移液管吸液准确，外壁也需擦干净（c）体积需控制在一定范围内，对pH有影响（d）煮沸时间要一致（e）注意指示剂加入时间和加入量一致（f）滴定速度一致（后滴定0.5～1mL，1min内完成）（g）产物Cu2O不稳定，次甲基蓝变色也不稳定，暴露于空气或沸腾颜色变化，滴定过程不能摇动，不可中途中止加热*第7页，讲稿共43页，2023年5月2日，星期三斐林试剂快速法：在斐林试剂中加入亚铁氰化钾（黄血盐）反应终点为蓝色消失，淡黄色出现。反应终点比兰－爱农法更为明显。*第8页，讲稿共43页，2023年5月2日，星期三2、碘量法I2→NaIO(氧化剂）其氧化能力较弱，仅适用于醛糖的测定，与酮糖不起反应操作要点：（1）标准硫代硫酸钠溶液配制，0.05mol/L，沸腾后冷却水配制，存放在棕色瓶中，一周后用标准重铬酸钾标定。（2）标准碘液配制，0.1mol/L（3）空白滴定：空白液，用硫代硫酸钠滴定试剂中全部碘*第9页，讲稿共43页，2023年5月2日，星期三碘量瓶中，10mL0.1mol/L碘液＋15mL0.1mol/LNaOH＋5mL空白液，摇匀后暗反应15min＋1mL1mol/L硫酸溶液，用0.05mol/L硫代硫酸钠滴定至浅黄色，加0.2mL0.5％淀粉液作指示剂，滴定至蓝色消失，记录V0(4)样品滴